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84 3 MATERIAL UND METHODEN
Bouillon in Reagenzgläsern gegeben; im Falle der Caeca erfolgte dies nach der
quantitativen Aufarbeitung eines Teils des Caecuminhaltes.
3.3.4.1 Quantitative Untersuchung
Von jedem einzelnen Tier wurden Caecuminhalt und Leber quantitativ untersucht.
Hierzu wurde die Blinddarmingesta mit Hilfe einer sterilen Deckglaspinzette nach
Kühne (Roth, Karlsruhe) herausgedrückt und direkt in ein 4 ml großes durchsichtiges
Polystyrolröhrchen mit rundem Boden und Lamellenstopfen (Nerbe plus, Winsen
Luhe) eingewogen. Die Einwaage betrug aufgrund der geringen Caeca-Inhalte der
jungen Tiere zwischen 0,200 und 0,280 g und wurde auch bei älteren Enten
beibehalten. Diese Menge wurde mit der neunfachen Menge an PBS-Lösung
aufgefüllt (Verdünnungsstufe 10 -1 ) und auf einem Reagenzglasschüttler homogen
vermischt. Von den Lebern wurde ein mindestens 0,5 g schweres Stück in ein 10 cm
langes Reagenzglas (VWR, Darmstadt) eingewogen, ebenfalls mit der neunfachen
Menge an PBS-Lösung aufgefüllt (erste Verdünnungsstufe 10 -1 ) und mit einem Ultra-
Thurrax® (IKA-Werke, Staufen) mit Hartkunststoff-Dispergierwerkzeug (Omni-Tip,
Omnilab, Bremen) bei einer Geschwindigkeit von 13.000 U/min zu einer homogenen
Suspension verarbeitet. In einer 48-Well Zellkulturplatte mit Deckel (3548, Corning
Costar, Wiesbaden) wurden die fünf Proben von Caecuminhalt bzw. Leber einer
Gruppe gleichzeitig verdünnt. Hierzu wurden in die benötigten Wells je 900 µl der
Verdünnungslösung (PBS-Lösung) vorgelegt und aus der Erstverdünnung 100 µl
hinzugefügt (zweite Verdünnungsstufe 10 -2 ). Nach der gründlichen Durchmischung
mit einer Mehrkanalpipette (Brand, Wertheim) wurden aus der zweiten
Verdünnungsstufe 100 µl in die nächste Vertiefung pipettiert. Auf diese Weise
wurden Verdünnungsreihen bis 10 -6 angelegt. Aus jeder Verdünnungsstufe wurden
100 µl im Doppelansatz auf Nalidixinsäure-supplementierten BPLS-Agar (Oxoid,
Wesel) gegeben und mit einem Drigalski Glasspatel (Roth, Karlsruhe) ausgespatelt.
Um die Nachweisgrenze für die in der Leber teilweise nur in geringer Anzahl
auftretenden Salmonellen zu erhöhen, wurden zusätzlich vier Agarplatten mit jeweils