Regulationsmechanismen von Oxacillinresistenz und Biofilmbildung ...

Inhaltsverzeichnis 2
2.2.8 Plasmidpräparation aus E. coli und Staphylokokken.............................. 33
2.2.9 Restriktionsverdau von Plasmid DNA.................................................... 34
2.2.10 Gelelektrophorese zur Auftrennung von DNA....................................... 34
2.2.11 Extraktion von DNA Fragmenten aus Agarosegelen ............................. 35
2.2.12 Ligation................................................................................................... 35
2.2.13 Elektroporation von E. coli..................................................................... 36
2.2.14 Elektroporation von Staphylokokken ..................................................... 37
2.2.15 Herstellung von Phagenlysaten............................................................... 37
2.2.16 Phagentransduktion................................................................................. 38
2.2.17 Homologer Genaustausch in S. epidermidis........................................... 39
2.2.18 Sequenzierung von DNA........................................................................ 42
2.2.19 Präparation von RNA aus S. epidermidis ............................................... 42
2.2.20 Herstellung Digoxigenin markierter Sonden .......................................... 44
2.2.21 Elektrophorese von RNA in denaturierenden Agarosegelen.................. 44
2.2.22 Transkriptionsanalyse mittels Northern Blot.......................................... 45
2.2.23 DNase Verdau und cDNA Synthese....................................................... 46
2.2.24 Quantitative Transkriptionsanalyse durch real time PCR ...................... 46
3 Ergebnisse .............................................................................48
3.1 Etablierung der Deletionsmutanten in S. epidermidis...................48
3.1.1 Generierung definierter Mutanten im σ B Operon ................................... 48
3.1.2 Transkription von erm und sigB in den Mutanten .................................. 51
3.1.3 Putativ σ B abhängiger Promotor vor rsbV .............................................. 53
3.1.4 σ B -Aktivität in den Deletionsmutanten von S. epidermidis 1457........... 54
3.2 Regulation der Biofilmbildung durch σ B ......................................57
3.2.1 Biofilmbildung der Mutanten des σ B Operons in S. epidermidis 1457 .. 57
3.2.2 Evaluation der PIA Synthese der Deletionsmutanten mittels IFT.......... 60
3.2.3 Transkriptionelle Regulation in S. epidermidis 1457 ............................. 63
3.2.4 Transduktion in unabhängige genetische Hintergründe ......................... 65
3.2.5 Evaluation der sarA Transkription in den Deletionsmutanten................ 72
3.2.6 Transkriptionsanalyse unter Induktion mit Ethanol................................ 74
3.3 Regulation der Biofilmbildung in S. epidermidis M12.................75
3.4 Expression der Oxacillinresistenz in den Deletionsmutanten.......77