Regulationsmechanismen von Oxacillinresistenz und Biofilmbildung ...

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on der in 3´ Richtung gelegenen Gene nicht signifikant inhibierte. Ein Großteil der
Transkripte wurde über diesen Terminator hinweg bis zu einem weiteren, unmittelbar
hinter sigB lokalisierten Transkriptionsterminator gelesen, so dass durch Hybridisierung
mit einer erm-spezifischen Sonde zwei Transkripte unterschiedlicher Größe und Intensität
nachgewiesen werden konnten (Abbildung 3.3 B und 3.4).
In B. subtilis und S. aureus konnte bereits ein σ B -abhängiger Promotor im σ B Operon
unmittelbar vor dem Gen rsbV identifiziert werden (Abbildung 1.3) 206, 240 . Im Wildtyp
S. epidermidis 1457 konnte durch Hybridisierung mit einer sigB-spezifischen Sonde ein
circa 1,7 kb großes Transkript detektiert werden (Abbildung 3.3 A und 3.4). Diese
Größe entsprach der zu erwartenden Größe bei einem Transkriptionsstart von dem
putativ σ B -abhängigen Promotor vor rsbV (Abbildung 3.4), so dass dieser Promotor
mittels real time PCR weiter untersucht wurde. Hierbei bot die Mutante S. epidermidis
1457sigB eine gegenüber dem Wildtypstamm um den Faktor 8,6 verringerte Transkription
von rsbV (Abbildung 3.5). Wie bereits ausgeführt wurde, konnte bezüglich der
Transkription von dem vor rsbU gelegenen σ A -abhängigen Promotor kein Transkriptionsunterschied
im Vergleich zum Wildtyp detektiert werden (Tabelle 3.2). Somit
konnte der weiter stromabwärts beobachtete σ B -abhängige Transkriptionsunterschied
auf den vor rsbV gelegenen Promotor zurückgeführt und seine σ B -abhängige Transkription
bestätigt werden.
4.2 Regulation der Biofilmbildung durch σ B
4.2.1 Untersuchung der σ B -Aktivität in S. epidermidis 1457
Aufgrund der posttranskriptionellen Regulation der σ B -Aktivität in Staphylokokken ließ
eine Transkriptionsanalyse des sigB Gens keine Aussage über die Menge des freien σ B -
Proteins zu (Abbildung 1.4). Um diesbezüglich eine Aussage zu treffen, musste ein
direkt σ B -abhängig transkribiertes Gen untersucht werden. Mittels primer extension
Analysen konnten Fluckiger et al. beweisen, dass der P 1 Promotor des sarA Gens in
S. epidermidis σ B -abhängig transkribiert wird 80 , so dass dieses Gen im Folgenden als
Indikator für die σ B -Aktivität verwendet wurde (Abbildung 3.7 B und 3.8 B). In S. epidermidis
wird sarA von zwei weiteren σ A -abhängigen Promotoren transkribiert 80 , deren
Transkripte in Northern Blot Experimenten als Kontrolle zum Vergleich unterschied-