Regulationsmechanismen von Oxacillinresistenz und Biofilmbildung ...

3 Ergebnisse 63
3.2.3 Transkriptionelle Regulation in S. epidermidis 1457
Da gezeigt werden konnte, dass der biofilmnegative Phänotyp mit einer fehlenden PIA
Synthese einhergeht, wurde zunächst die Transkription des PIA Syntheseoperons
88, 106
icaADBC analysiert.
Hierfür wurde die RNA während der exponentiellen
Wachstumsphase in Zellkulturschalen mit Nuclon Delta Oberfläche unter statischen Bedingungen
aus den Zellen isoliert. Mittels Northern Blot Hybridisierung mit einer icaAspezifischen
Sonde konnte ein circa 3,6 kb großes Transkript in S. epidermidis 1457
detektiert werden (Abbildung 3.15 A). In den Mutanten 1457rsbV, 1457sigB und
1457rsbUVWsigB hingegen konnten dieses Transkript nicht mehr detektiert werden,
während in 1457rsbU in einzelnen Experimenten ein im Vergleich zum Wildtyp sehr
schwaches Signal beobachtet werden konnte (nicht in dem gezeigten Blot). Für die Mutanten
1457rsbW und 1457rsbUVW konnten im Vergleich zum Wildtyp keine signifikanten
Unterschiede bezüglich der icaA Transkription detektiert werden. Interessanterweise
konnte, trotz der demonstrierten σ B -abhängigen Regulation mittels Konsensussequenzsuche
206 kein σ B -abhängiger Promotor stromaufwärts des icaADBC Operons gefunden
werden.
Abbildung 3.15 Transkriptionsanalyse von S. epidermidis 1457 mit den entsprechenden Deletionsmutanten
in Northern Blot Technik mittels Hybridisierung mit einer icaA-spezifischen
(A), bzw. icaR-spezifischen (B) Sonde. Es ist außerdem die genetische Organisation mit
den publizierten σ A -abhängigen Promotoren (P A ) dargestellt (gene bank accession no.:
SEU43366). In Mutanten mit fehlender, beziehungsweise stark verminderter σ B -
Aktivität stellte sich die icaA Transkription deutlich vermindert dar. Die Transkription
des negativen Regulators icaR hingegen war in diesen Mutanten, im Vergleich zu dem
Wildtypstamm, deutlich gesteigert. Es sind jeweils Ergebnisse repräsentativer Experimente
gezeigt.
Außerdem wurde der kürzlich beschriebene negative Regulator der icaADBC Transkription
icaR (intercellular adhesion regulator) 45 mit Hilfe einer Digoxigenin markierten,
icaR-spezifischen Sonde in Northern Blot Technik unter den vorhergehend aufgeführten