Regulationsmechanismen von Oxacillinresistenz und Biofilmbildung ...

B
3 Ergebnisse 54
Für die von dem σ A -abhängigen Promotor ausgehende Transkriptionseinheit wurde in
der Mutante 1457sigB verglichen mit dem Wildtyp, kein signifikanter Transkriptionsunterschied
detektiert (Tabelle 3.2, Abbildung 3.5). Mittels real time PCR mit den
Primern rsbVW-real1.for und rsbVW-real2.rev (Tabelle 2.5, Abbildung 3.5), wurde die
Transkription der stromabwärts des putativ σ B -abhängigen Promotors gelegenen Gene
untersucht. Es konnte eine gegenüber dem Wildtypstamm um den Faktor 8,6 verringerte
Transkription von rsbV dokumentiert werden. Somit konnte belegt werden, dass der
putativ σ B -abhängige Promotor vor rsbV tatsächlich σ B -abhängig transkribiert wird.
Abbildung 3.5
Schematische Darstellung des σ B Operons von S. epidermidis 1457. Gerade Pfeile markieren
offene Leserahmen. P A und P B repräsentieren σ - beziehungsweise σ -abhän-
A
B
gige Promotoren. Geknickte Pfeile markieren die Lage der verwendeten real time PCR
Primer in Bezug zu den untersuchten Promotoren (nicht maßstabsgetreu, vergleiche
Tabelle 2.5).
3.1.4 σ B -Aktivität in den Deletionsmutanten von S. epidermidis 1457
Aus B. subtilis uns S. aureus war bekannt, dass die Aktivität von σ B posttranskriptionell
durch die Genprodukte der regulativen Gene rsbU, rsbV und rsbW moduliert wird 22-24,
60, 240 . Somit konnte die Transkriptionsanalyse von sigB (Kapitel 3.1.2) nicht herangezogen
werden, um zu überprüfen, ob in S. epidermidis eine vergleichbare Regulation
besteht. Es mussten daher zur Beurteilung der σ B -Aktivität solche Gene untersucht
werden, die σ B -abhängig transkribiert werden. In S. epidermidis war der P 1 Promotor
des sarA Gens (staphylococcal accessory gene regulator A) der bisher einzige beschriebene
Promotor, dessen σ B -abhängige Transkription mittels Primer extension Analyse
bestätigt wurde 30, 80 . Da sarA in S. epidermidis jedoch von zwei weiteren σ A -abhängigen
Promotoren transkribiert wird 80 , war es für die im weiteren Verlauf geplante Analyse
der σ B -Aktivität mittels real time PCR ungeeignet. Zu diesem Zweck sollte zusätzlich
die Transkription eines weiteren, möglichst ausschließlich σ B -abhängigen Gens
charakterisiert werden. Das alkaline shock protein 23 (asp23) ist in S. aureus als σ B -