Regulationsmechanismen von Oxacillinresistenz und Biofilmbildung ...

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dis 1057 transduziert, da typische S. epidermidis Isolate aus Fremdkörper-assoziierten
Infektionen Oxacillin-resistent sind 83, 157, 221, 295 .
In diesen neu generierten Mutanten wurde ebenfalls ein differentieller Phänotyp der
Biofilmbildung beobachtet. Dieser war vergleichbar mit der Biofilmexpression von
S. epidermidis 1457 und den jeweiligen Mutanten (Abbildung 3.17 und 3.18). Eine
Messung der asp23 Transkription in den ΔrsbUVWsigB Mutanten zeigte eine 280- bis
830-fache Reduktion der σ B -Aktivität, so dass eine Inaktivierung des alternativen
Sigmafaktors in diesen Mutanten bestätigt werden konnte (Abbildung 3.22). Die
ΔrsbUVW Mutanten der Stämme 8400 und 1057 zeigten ebenfalls eine leicht verminderte
σ B -Aktivität in der exponentiellen Wachstumsphase. In der stationären Phase bot
lediglich die Mutante 1057rsbUVW eine gering reduzierte σ B -Aktivität (Abbildung
3.22). Diese Beobachtung unterstützt die Annahme, dass σ B in ΔrsbUVW Mutanten
konstitutiv exprimiert wird, während es im Wildtypstamm zu einer Hochregulation in
der exponentiellen Wachstumsphase kommt.
Die phänotypische Charakterisierung der Mutanten mit Inaktivierung von rsbU
(1457rsbU, 8400rsbU, 1057rsbU) zeigte eine extrem verminderte PIA Synthese und
Biofilmbildung unter den Standard-Anzuchtbedingungen in TSB Medium. Supplementierung
des Mediums mit NaCl führte weder zu einer Rekonstitution der PIA Synthese
noch der Biofilmbildung, wohingegen die Beimengung von Ethanol einen PIAund
Biofilm-positiven Phänotyp induzierte (Abbildung 3.9, 3.12 bis 3.14 und 3.17 bis
3.20). Dieser Phänotyp korrespondierte mit dem von Knobloch et al. dokumentierten
Verhalten der Transponsoninsertions-Mutanten M15 und 8400-M15 148 . Gleichzeitig imponierte
die bereits für die Mutanten M15 und 8400-M15 beobachtete verminderte Pigmentierung
der Kolonien. Somit konnte untermauert werden, dass die in den M15
Mutanten beobachteten phänotypischen Veränderungen auf einer Inaktivierung von
rsbU beruhen und nicht durch polare Effekte der Transposoninsertion bedingt sind.
Der unter Standard Kulturbedingungen beobachtete PIA- und Biofilm-negative Phänotyp
der Mutanten 1457rsbV, 8400rsbV und 1057rsbV belegte die Annahme, dass die
RsbU-abhängige Modulation der σ B -Aktivität über RsbV erfolgt, wobei RsbV als
positiver Regulator der σ B -Aktivität fungiert (Abbildung 3.9, 3.13 bis 3.14 und 3.17 bis
3.20). Eine direkte, σ B -unabhängige Regulation der Biofilmexpression durch RsbU und
RsbV konnte aufgrund des PIA- und Biofilm-negativen Phänotyps der sigB Mutanten
mit intaktem rsbU und rsbV (1457sigB, 8400sigB, 1057sigB) ausgeschlossen werden.