Regulationsmechanismen von Oxacillinresistenz und Biofilmbildung ...

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jedoch nicht durch NaCl Supplementierung des Kulturmediums rekonstituiert werden.
Die Mutanten 1457rsbW und 1457rsbUVW zeigten in TSB Medium eine gegenüber
dem Wildtyp gesteigerte Biofilmbildung, welche durch Zugabe von Ethanol und NaCl
noch weiter gesteigert werden konnte (Abbildung 3.9).
Mittels Phagentransduktion wurden alle Deletionen zurück in den Ausgangsstamm
S. epidermidis 1457 transduziert. Da alle Transduktanten im Vergleich zu den primär
generierten Mutanten einen nahezu identischen Phänotyp boten, konnte die Koppelung
von Genotyp und Phänotyp bestätigt werden (Abbildung 3.9 und 3.11). Alle Mutanten
erreichten unter statischen Kulturbedingungen Zellzahlen, welche mit dem Wildtypstamm
vergleichbar waren, so dass die Unterschiede der Biofilmexpression nicht auf
unterschiedliche Wachstumsraten zurückzuführen sind (Abbildung 3.10).
Das Transkriptionsverhalten der Mutanten wurde mittels Northern Blot Analysen und
real time PCR Untersuchungen überprüft. Eine Transkription von dem putativen σ A -abhängigen
Promotor vor rsbU konnte mittels Hybridisierung mit einer rsbU-spezifischen
Sonde in Northern Blot Technik weder im Wildtyp, noch in den Mutanten nachgewiesen
werden. Mit Hilfe der real time PCR konnte jedoch gezeigt werden, dass zwischen
Wildtyp und Mutanten mit intaktem rsbU keine signifikanten Transkriptionsunterschiede
für rsbU bestanden (Abbildung 3.5, Tabelle 3.2).
Hybridisierungen mit einer sigB-spezifischen Sonde wiesen in den Mutanten 1457rsbU,
1457rsbV, 1457rsbW und 1457rsbUVW Transkripte nach, deren Größe einen Transkriptionsstart
von dem σ A -abhängigen Promotor des erm Gens vermuten ließen (Abbildung
3.3 A und 3.4). Mittels Hybridisierung mit einer erm-spezifischen Sonde konnten in
diesen Mutanten Transkripte identischer Größe detektiert werden (Abbildung 3.3 B). Da
im Northern Blot keine Transkription von dem vor rsbU gelegenen Promotor detektiert
werden konnte, spricht die beobachtete identische Größe der mit den beiden Sonden
hybridisierten Transkripte dafür, dass die Transkription von dem stärkeren σ A -abhängigen
erm Promotor erfolgte. Auch in den Mutanten 1457sigB und
1457rsbUVWsigB konnten mittels Hybridisierung mit einer erm-spezifischen Sonde
Transkripte detektiert werden, deren Größen dieser Hypothese entsprachen (Abbildung
3.3 B). Weiterhin wurde mittels einer erm-spezifischen Sonde in allen Mutanten ein schwaches,
circa 1,2 kb großes Transkript detektiert, dessen Größe der Erythromycin Resistenzkassette
entsprach. Somit konnte gezeigt werden, dass dem erm Gen ein
schwacher Transkriptionsterminator nachgeschaltet ist, welcher jedoch die Transkripti-