Regulationsmechanismen von Oxacillinresistenz und Biofilmbildung ...

3 Ergebnisse 53
Transkripte (Abbildung 3.3 B). In den Mutanten 1457sigB und 1457rsbUVWsigB
konnte ein jeweils circa 1,3 kb großes Transkript nachgewiesen werden, während im
Wildtyp S. epidermidis 1457 erwartungsgemäß kein Signal mit der erm-spezifischen
Sonde zu detektieren war. Weiterhin konnte mit dieser Sonde in allen Mutanten ein
schwaches, circa 1,2 kb großes Transkript hybridisiert werden. Dieses entsprach der
Erythromycin Resistenzkassette, welche einen schwachen Transkriptionsterminator
besitzt, der jedoch die Transkription der in 3´ Richtung gelegenen Gene nicht
signifikant inhibierte.
Ein von dem vor rsbU gelegenen σ A -abhängigen Promotor abgelesenes Transkript
konnte in keinem der untersuchten Stämme mittels Hybridisierung mit einer rsbUspezifischen
Sonde detektiert werden (Daten nicht gezeigt). Somit umfasst das im Wildtypstamm
mit einer sigB-spezifischen Sonde nachgewiesene 1,7 kb große Transkript nur
rsbV, rsbW und sigB, jedoch nicht rsbU. Mittels real time-PCR mit den im rsbU Gen
gelegenen Primern rsbU-real1.for und rsbU-real2.rev (Tabelle 2.5, Abbildung 3.5)
konnte gezeigt werden, dass zwischen Wildtyp und Mutanten mit intaktem rsbU keine
signifikanten Transkriptionsunterschiede für rsbU bestanden, während in Mutanten mit
deletiertem rsbU erwartungsgemäß auch mittels real time-PCR kein solches Transkript
nachweisbar war (Tabelle 3.2).
1457rsbU 1457rsbV 1457rsbW 1457sigB 1457rsbUVW 1457rsbUVWsigB
nicht - 1,37 fach + 1,8 fach + 1,11 fach nicht nicht
nachweisbar
nachweisbar nachweisbar
Tabelle 3.2
Relativer Transkriptionsunterschied von rsbU zwischen S. epidermidis 1457 Wildtyp
und den jeweiligen Mutanten. Es handelt sich um Mittelwerte aus je drei unabhängigen
real time PCR Experimenten, berechnet mittels 2 -ΔΔC T.Methode.
Diese Ergebnisse der Northern Blot Analyse demonstrierten die korrekte Insertion der
Erythromycinkassette und bestätigten das gewünschte Transkriptionsverhalten der
Deletionsmutanten, so dass die Mutanten weiter charakterisiert wurden.
3.1.3 Putativ σ B abhängiger Promotor vor rsbV
Für B. subtilis und S. aureus konnte bereits ein σ B -abhängiger Promotor im σ B Operon
unmittelbar vor dem Gen rsbV identifiziert werden 206, 240 . Auch in S. epidermidis 1457
konnte ein putativ σ B -abhängiger Promotor (TAGATTAA N 14 GGGTAT) mit hoher
Homologie zu der Konsensussequenz für σ B -abhängige Promotoren ausgemacht werden
(Abbildung 3.5) 101, 206 .