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Zum Nachweis des Trypsins benutzte ich zwei Methoden, nämlich:
1) neutrale 10V> Gelatinelösung,
tion, jedoch mit l°/ 0
2)
Soda versetzt.
und ausserdem eine solche derselben Konzentra-
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die von GROSS, FULD, MICHAELIS )
angegebene Methode, die folgender-
massen ausgeführt wurde.
0,1 gr. Kasein wurden unter gelinder Erwärmung in wenig Wasser bei gleichzeitigem
Zusatz von 10 Tropfen 10°/ 0 Sodalösung aufgelöst mit Wasser auf 200 ccm. verdünnt und
filtriert. Zu je 6 ccm. des blanken Filtrats wurden je 2 ccm. der zu untersuchenden
Glyzerinauszuge zugesetzt, und die Reagensgläschen
auf eine Stunde in ein Wasserbad
von 37—40* C gestellt. Nach dieser Zeit wurde die Flüssigkeit, falls sie nicht
nügend klar war, filtriert, und dann tropfenweise eine 0,25% Essigsäure zugesetzt.
Bekanntlich wird bei Anwesenheit von Trypsin das Kaseinmolekül gespalten, wobei
Verbindungen entstehen, die von Essigsäure nicht gefällt werden, während unverändertes
Kasein durch Säure niedergeschlagen wird.
Die untersuchten Auszüge aus der Leber der Skorpione bewirkten in allen drei
ausgeführten Versuchen die Verflüssigung sowohl der neutralen, als auch der mit Soda
versetzten Gelatine und gaben bei der oben beschriebenen Kaseinprobe
in positivem Sinne.
ge-
eine Reaktion
Die Auszüge aus der Bauchspeicheldrüse verflüssigten auch sowohl die neutrale,
als auch die alkalische Gelatine, jedoch in geringerem Grade, als die aus der Leber,
während die Kaseinprobe in diesem Falle negativ ausfiel.
Die Erklärung liegt scheinbar darin, dass die Gelatine, wie die Versuche von
FERMI 5
) gezeigt haben, ein empfindlicheres Reagens auf Trypsin ist, als das Kasein.
Die aus dem Darm gewonnenen Auszüge verflüssigten weder die Gelatine, noch
gaben sie mit Kasein ein positives Resultat.
Chymosin.
Das Chymosin oder das Labferment hat die Eigenschaft, das Kasein
der Milch
zu koagulieren, wobei es in eine noch nicht ganz aufgeklärte Form übergeführt wird.
Der grösste Teil des Kaseins wird unter dem Einfluss des Chymosins bei Gegenwart
genügender Mengen von Kalziumsalzen, als Parakasein ausgefällt.
Über das Vorkommen von Chymosin in den Skorpionen finden sich in der Literatur
keinerlei Angaben.
Zur Bestimmung dieses Ferments wurden 10 ccm. Milch mit 90 ccm. Wasser ver-
dünnt, und 1,0 ccm. einer 10°/ 0 Chlorkalziumlösung hinzugefügt.
5 ccm. dieses Gemisches
wurden in Reagensglas mit 20 Tropfen des Glyzerinauszuges versetzt. Darauf kam die
Mischung in ein Wasserbad von 40° C.
Dabei wurde in allen drei angestellten
Versuchen bemerkt, dass in den Gläschen,
die den Auszug aus der Leber enthielten, das Kasein der Milch in 10—15 Minuten ge-
ronnen war.
Im zweiten Versuch, der mit dem Auszuge aus der Bauchspeicheldrüse angestellt
wurde, gerann das Kasein nach 50 Minuten, beim ersten und dritten Versuch dagegen
trat auch nach 4-stündiger Erwärmung bei 40° C keine Koagulation
Zeit wurde der Versuch in beiden Fällen abgebrochen.
ein. Nach dieser
Auch in den Proben, die den Auszug aus dem Darm enthielten, trat nach 4-stün-
diger Erwärmung bei 40° C keine Fällung ein.
») ABDERHALDEN, Handbuch d. biochem. Arbeitsmethoden 3, 1910, 19.
*) FERMI, Vorlesungen über Bakterienenzyme. Jena 1907.