View - JUWEL - Forschungszentrum Jülich

4.4. Optimierung der Reaktionsbedingungen
______________________________________________________________________
Tabelle 4.4: Ergebnisse der Enzymaufreinigung im Vergleich mit anderen Arbeiten
Diese Arbeit
Säule
Satz
[Miller et al.
1987]
[Maremonti et
al. 1996]
Isolierung aus rek. E. coli Corynebacterium sp.
Methoden
Ausbeute
[mg Protein /g Zellen ]
Isoliertes Protein
pro
Aufreinigungszyklus
[mg]
spez. Aktivität
[U/mg Protein ]
Gesamtaktivität
isoliertes Protein
[U]
Ni-Affinitätschrom.,
Ionenaustauschchrom.
Ionenaustauschchrom.,
Affinitätschrom.,
Gelfiltrationschrom.
Ionenaustauschchrom.,
Affinitätschrom.,
0,16 0,31 0,02 n.a.
1,2
– 9,8
1,4
– 6,7
11,7
– 95,2
1,4
– 8,4
5,9 0,5
3,4 2,0
322 1416 20,1 1,0
[Sonoyama et al.
1987b]
Ionenaustauschchrom.,
Affinitätschrom.,
0,004 (Red. A)
0,001 (Red. B)
2,72 (Red. A)
0,91 (Red B)
3,05 (Red. A)
101 (Red. B)
8,3 (Red. A)
92 (Red. B)
4.4. Optimierung der Reaktionsbedingungen
Die Reaktionsbedingungen wurden optimiert, indem jeweils ein einzelner Parameter
variiert und alle anderen konstant gehalten wurden.
4.4.1.1 Temperatur
Wie erwartet, nimmt die Enzymaktivität zu, wenn die Temperatur steigt
(Abbildung 4.16).
Aktivität / U * mg Protein
-1
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
Temperatur / °C
Abbildung 4.16: Einfluss der Temperatur auf die Aktivität der 2,5-DKGR. Bedingungen: 15-50°C, 50 mM
KP i -Puffer pH 6,4, 0,2 mM NADPH, 14,6 mM 2,5-DKG, 340 nm. Enzymcharge IX.
94