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4.6. Enzymkinetiken
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Aktivität / U * mg -1
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0 2 4 6 8 10
Konzentration NAD / mM
Abbildung 4.27: Kinetik der 2,5-DKGR mit NADH als Cofaktor. Bedingungen: 20 °C, 100 mM Na-Acetat,
50 mM KP i -Puffer, pH 6,4, 41,3 mM 2,5-DKG, 6 mM NADH, 0-10 mM NAD. Enzymcharge J/K.
Auch mit NADH als Cofaktor werden hohe Enzymaktivitäten verzeichnet. Damit eine
Reaktion beobachtet wird, sind jedoch sehr hohe Konzentrationen Cofaktor nötig, so
wie bei Versuchen mit rekombinanten E .coli-Zellen (siehe Seite 86) und den
Versuchen zur Cofaktorregenerierung mit einer NAD + -abhängigen FDH (4.2.2).
Mit Formel 4.2 wurde ein entsprechendes Modell an die Messwerte angepasst:
v
K
M
v max cNADH
cNAD
NADH (1 ) cNADH K
K NAD
i
M
c2,5DKG
c2,5DKG
2,5DKG c2,5DKG (1
)
K 2,5DKG
Formel 4.2: Formel zur Modellierung der Enzymkinetik (NADH-abhängig)
i
Die kinetischen Konstanten für die Reduktion von 2,5-DKG mit NADH als Cofaktor
zeigt Tabelle 4.6.
Tabelle 4.6: Ergebnisse der Modellierung nach Formel 4.2
v max 37,3 ± 7,9 U · mg -1
K M NADH
K M 2,5-DKG
K i NAD
K i 2,5-DKG
1,3 ± 0,1 mM
67,6 ± 18,5 mM
2,5 ± 0,3 mM
39,5 ± 11,8 mM
Wie erwartet, ist der K M -Wert für NADH recht hoch – auch der K M -Wert für 2,5-DKG
steigt, wenn NADH und nicht NADPH als Cofaktor verwendet wird: Die Aktivität ist
hier bei etwa 50 mM 2,5-DKG maximal (mit NADPH: bei ca. 15 mM).
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