View - JUWEL - Forschungszentrum Jülich

Anhang
______________________________________________________________________
A.2.4
A.2.4.1
Kinetik der ADH aus Lactobacillus brevis
Oxidation von Isopropanol
Die Lb-ADH zeigt eine Michaelis-Menten-Doppelsubstratkinetik (Isopropanol, NADP + )
ohne Substratüberschussinhibierung. Sie wird durch das Produkt Aceton und den reduzierten
Cofaktor NADPH gehemmt (Abbildung A-9) und durch 2-KLG inhibiert
(Abbildung A-10).
Aktivität / U * mg -1
2,0
1,8
1,6
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
Aktivität / U * mg -1
2,0
1,8
1,6
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0 50 100 150 200 250 300
Konzentration Isopropanol / mM
0,2
0,0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
Konzentration NADP / mM
2,0
2,0
1,8
1,8
1,6
1,6
Aktivität / U * mg -1
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
Aktivität / U * mg -1
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,2
0,0
0 50 100 150 200
Konzentration Aceton / mM
0,0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
Konzentration NADPH / mM
Abbildung A-9: Enzymkinetik der Lb-ADH für die Oxidation von Isopropanol mit NADP als Cofaktor.
Bedingungen: 20°C, 100 mM Na-Acetat, 50 mM KP i -Puffer, pH 6,4, 0,1 mg/mL Lb-ADH, V=1mL. Oben links:
0,19 mM NADP, 0-300 mM Isopropanol. Oben rechts: 157 mM Isopropanol, 0-2,1 mM NADP. Unten links:
0,4 mM NADP, 157 mM Isopropanol, 0-218 mM Aceton. Unten rechts: 157 mM Isopropanol, 0,1 mM NADP,
0-2 mM NADPH.
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