Universidad de Córdoba BIODISPONIBILIDAD MINERAL DE ...

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Transcurrido ese tiempo se desecha el sobrenadante de la cámara apical, el contenido de la cámara basal se recoge en vasos de precipitados de 100 mL y la superficie celular se lava, tres veces, con una disolución tampón (150 mmol / L NaCl, 1 mmol / L EDTA, 10 mmol / L HEPES) a 4ºC, para retirar el medio residual y los metales unidos de forma inespecífica a la monocapa celular. La monocapa celular se lisa con 1 mL de dodecil sulfato sódico (2% SDS) con ayuda de un rascador de células y se trasvasa a vasos de precipitados de 100 mL. El contenido de la cámara basal y las células lisadas se llevan a sequedad en una placa calefactora y se introducen en la mufla para destruir la materia orgánica vía seca (450ºC), según el procedimiento descrito en el apartado de contenido mineral. Los contenidos de calcio, hierro y cinc se determinan por espectrofotometría de absorción atómica (EAA-llama) y el contenido de cobre por espectrofotometría de absorción atómica-cámara de grafito (EAA-CG). La captación de calcio, hierro cinc y cobre se estima por diferencia entre el contenido mineral en las células adicionadas de muestra y el blanco de células. El transporte de calcio, hierro cinc y cobre se estima por diferencia con el blanco del contenido mineral en la cámara basal (tampón de captación). El ensayo de captación y transporte mineral se representa en la figura 3. 75
Biodisponibidad mineral de menús escolares Figura 3.- Ensayo de captación y transporte mineral por células Caco-2 Fracción soluble calentada, disolución patrón y blanco Lavado de la cámara apical y basal tres veces con PBS (37ºC) Ajuste de osmolaridad, pH y adición de glucosa Adición de 1.5 mL en la cámara apical Adición de 2.5 mL de Tampón de captación en la cámara basal Monocapa celular (19- 21 días postsiembra) CAPTACIÓN Y TRANSPORTE 2h / 37ºC / 5% CO2 y 95 % humedad relativa DIGESTIÓN VÍA SECA (450ºC) ‣ Recoger sobrenadante de cámara apical y contenido basal. ‣ Lavar la monocapa celular y cámara basal con 1.5 y 2.5 mL, respectivamente, con tampón. ‣ Lisis celular (1 mL SDS 2%). ‣ Disolución de cenizas DETERMINACIÓN DE Ca, Fe y Zn por EAA ESTIMACIÓN MONOCAPA CELULAR: CAPTACIÓN MEDIO BASAL: TRANSPORTE Cortesía de B. Viadel. Tesis Doctoral (2002) 76
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