Mechanische Anisotropie von Proteinen in ...

76 A. Fluoreszenzeigenschaften von GFP Polyproteinen
Abbildung A.4: Fluoreszenz-Zeitverhalten einzelner (132, 212) mutierter eGFP Polyproteine. a)
Dimere b) Tetramere c) Nonamere d) 16-mere e) Unbekannte Länge. Die Daten sind vertikal
verschoben worden.
tierter eGFP Moleküle zeigt dabei die gleichen Eigenschaften wie die des nativen eGFP.
Auf gleiche Weise sind nun einzelne Leuchtpunkte in den aufgereinigten eGFP-Polyprotein
Lösungen verschiedener Länge analysiert worden. Die Experimente wurden dabei unter
exakt den gleichen Bedingungen wie für die Monomere durchgeführt. Abb. A.4 zeigt das
typische Fluoreszenz-Zeitverhalten einzelner Polyproteine verschiedener Länge.
Abb. A.4 a) zeigt typische Signale von Dimeren, in denen deutlich zwei diskrete Intensitätsniveaus
identifiziert werden können. Abb. A.4 b) bis e) zeigen immer komplexer
werdende und stark rauschende Intensitätssignale, die jedoch auf derselben Zeitskala wie
die Monomere und Dimere abklingen. Die absolute Intensität der Leuchtsignale nimmt
von Abb. A.4 a) bis e) dabei etwa um einen Faktor 20 zu. In der Tetramer-Fraktion (b)
ist es noch möglich, diskrete Intensitätsniveaus zu identifizieren, für Polyproteine größerer
Länge ist dies nicht mehr möglich. Das starke Rauschen von offenbar unabhängig voneinander
statistisch zwischen Leucht- und Dunkelzuständen wechselnden einzelnen eGFP
Moleküle macht dies unmöglich.
Für Abb. A.5 a) sind die Fluoreszenz-Zeitkurven mehrerer Leuchtpunkte aus den Polyproteinfraktionen
verschiedener Länge gemittelt worden. Es ist klar ersichtlich, dass
die absolute Fluoreszenzintensität der einzelnen Leuchtpunkte mit zunehmender Länge