termoestabilidad de sustancias antimicrobianas en la leche - RiuNet

Material y Métodos
- Vial 5: Control positivo de detección. A una muestra de leche de 10 g se le
añadieron los volúmenes necesarios de cada solución diluida (10 µg/g) para
obtener una muestra de leche con una concentración final de antibióticos
igual al límite de detección de cada uno de ellos
- Vial 6: Agua ultra pura
- Vial 7 y sucesivos: Extractos de las muestras de leche fortificadas y
tratadas térmicamente
A continuación, se programó el análisis del conjunto de muestras mediante el
software Empower Pro. (Waters) con las siguientes condiciones cromatográficas:
- Fase móvil en modo gradiente con las siguientes condiciones:
Tiempo
(min)
- Flujo de 1mL/minuto
- Tiempo de análisis por muestra de 50 minutos
- Tiempo entre inyecciones de 10 minutos
- Volumen de inyección de 1000 µL
- Lectura mediante detector UV a 210 nm para las penicilinas y 265 nm para
las cefalosporinas
Bomba A
(% AcN)
Se programó también un colector a la salida del detector para recoger las
fracciones en las que eluirían los analitos. Estas se colectaron en intervalos de tiempo
de 5 minutos en el transcurro del ensayo cromatográfico.
Debido al volumen de inyección tan elevado, era posible que ocurrieran
pequeñas variaciones en el tiempo de retención, y de esta forma se aseguró que el
antibiótico se encontraba realmente en una de las fracciones recogidas.
Se observó el tiempo de retención de cada antibiótico correspondiente al
control de 10 µg/g y se tomó esa fracción para la determinación cromatográfica, tanto
en muestras de leche fortificadas, controles positivos y control negativo, en tubos
graduados convenientemente rotulados. Puesto que el flujo de la fase móvil era de 1
mL/min las fracciones obtenidas resultaron de 5 mL.
Bomba B
(% KH2PO4)
0 – 3 100 0
3 – 40 60 40
40 – 50 100 0
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