INFECCIONES POR OOMYCETES EN POBLACIONES DE ... - Gredos

Infecciones por Oomycetes en poblaciones de anfibios de la Sierra de Gredos (Ávila)
agua y se siguió el mismo procedimiento que con los huevos para llevar a cabo
los aislamientos.
Figura 1.1. Aspecto de los embriones infectados por Saprolegnia sp.
Extracción de ADN, amplificación por PCR y secuenciación
Previo al análisis molecular, se sembraron fragmentos de micelio en cultivos en
gota de peptona glucosa (PG1) (Cerenius & Söderhäll, 1985). A partir de estos
cultivos se llevó a cabo el aislamiento de ADN total y el análisis de las regiones
ITS del ADN ribosómico nuclear (ADNrn). Este proceso se llevó a cabo en el
Laboratorio de Sistemática Molecular del Real Jardín Botánico por los Drs.
Javier Diéguez-Uribeondo y María P. Martín y su equipo, siguiendo los
protocolos descritos en Martín et al. (2004) y Diéguez-Uribeondo et al. (2007).
La amplificación de las regiones ITS, incluida la subunidad 5.8 S del ADNrn, se
realizó con el par de iniciadores ITS5/ITS4 (White et al., 1990) y en un volumen
final de 25 µl mediante Ready-To-Go® Beads (GE Healthcare,
Buckinghamshire, Reino Unido). Una vez obtenidas las secuencias lineales con
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