INFECCIONES POR OOMYCETES EN POBLACIONES DE ... - Gredos

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Infecciones por Oomycetes en poblaciones de anfibios de la Sierra de <strong>Gredos</strong> (Ávila) agua y se siguió el mismo procedimiento que con los huevos para llevar a cabo los aislamientos. Figura 1.1. Aspecto de los embriones infectados por Saprolegnia sp. Extracción de ADN, amplificación por PCR y secuenciación Previo al análisis molecular, se sembraron fragmentos de micelio en cultivos en gota de peptona glucosa (PG1) (Cerenius & Söderhäll, 1985). A partir de estos cultivos se llevó a cabo el aislamiento de ADN total y el análisis de las regiones ITS del ADN ribosómico nuclear (ADNrn). Este proceso se llevó a cabo en el Laboratorio de Sistemática Molecular del Real Jardín Botánico por los Drs. Javier Diéguez-Uribeondo y María P. Martín y su equipo, siguiendo los protocolos descritos en Martín et al. (2004) y Diéguez-Uribeondo et al. (2007). La amplificación de las regiones ITS, incluida la subunidad 5.8 S del ADNrn, se realizó con el par de iniciadores ITS5/ITS4 (White et al., 1990) y en un volumen final de 25 µl mediante Ready-To-Go® Beads (GE Healthcare, Buckinghamshire, Reino Unido). Una vez obtenidas las secuencias lineales con 82
Aislamiento, identificación y virulencia de las especies de Saprolegnia Tabla 1.1. Aislamientos de Saprolegniales obtenidos en la zona de estudio. La identificación a nivel de género o especie se realizó mediante el análisis de caracteres moleculares (ITS ADNrn) Aislamiento Especie identificada Población Origen SAP243 S. diclina PT B. calamita SAP244 S. diclina PT P. cultripes SAP433 Leptolegnia sp. MC P. cultripes SAP434 Leptolegnia sp. MC B. calamita SAP435 S. diclina PT P. cultripes SAP436 S. diclina PT P. cultripes SAP440 S. diclina PP B. calamita SAP441 S. diclina PP B. bufo SAP442 S. ferax PT P. cultripes SAP443 S. diclina PP P. perezi SAP444 Saprolegnia sp. PP P. perezi SAP445 Leptolegnia sp. MC P. cultripes SAP446 Leptolegnia sp. MC P. cultripes SAP447 S. ferax MC B. calamita SAP448 S. ferax MC B. calamita SAP450 S. ferax MC B. calamita SAP452 S. diclina PT P. cultripes SAP455 Achlya flagellata-caroliniana PN B. calamita SAP456 S. diclina PT H.arborea SAP457 Leptolegnia sp. MC P. cultripes SAP458 Leptolegnia sp. MC P. cultripes SAP461 Saprolegnia sp. PT H. arborea SAP463 S. diclina PP B. bufo SAP464 Saprolegnia sp. PP P. perezi SAP465 S. diclina PT P. perezi SAP479 S. ferax MC B. calamita SAP480 S. diclina PT B. calamita SAP482 Achlya flagellata-caroliniana PN B. calamita SAP483 S. diclina PT P. cultripes 83
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