Régulation des populations de Nématodes gastro-intestinaux ...

Procédures expérimentales
Figure n°16 : Coupes histologiques de caillette d’ovins infestés par H. contortus, mettant en
évidence des macrophages (A, marquage immunohistochimique sur coupes en paraffine,
anticorps Ki-M6, grossissement 400) et des lymphocytes B (B, marquage
immunohistochimique sur coupes en paraffine, anticorps BLA-36, grossissement 400).
6.2. Immunohistochimie sur coupes en congélation
6.2.1. Collecte et technique des prélèvements
Des fragments de muqueuse digestive, identiques à ceux prélevés pour histologie
conventionnelle, ont été immédiatement congelés lors de l’autopsie dans de l’azote liquide,
après avoir été placés sur des bouchons de liège préalablement imprégnés de Tissue-Tek
(Labonord). Le support de liège permet de conserver une orientation correcte des
prélèvements pour leur utilisation ultérieure (dans le cas particulier de la muqueuse digestive,
conservation d’une orientation transversale nécessaire à l’observation microscopique des
différentes couches de la paroi). Les échantillons sont alors conservés à –70°C jusqu’à la
coupe. Celle-ci est effectuée à l’aide d’un cryomicrotome (Leika). Les sections de 5 µm
d’épaisseur ainsi obtenues sont montées sur des lames prétraitées (Superfrost Plus, Labonord)
et fixées pendant 20 minutes dans un bain d’acétone.
6.2.2. Immunohistochimie
Le protocole utilisé sur des coupes obtenues en congélation est identique à celui décrit pour
les coupes en paraffine, à la seule différence qu’il n’existe évidemment pas d’étapes de
déparaffinage ni de démasquage antigénique. Cette technique est nécessaire pour la mise en
102