Régulation des populations de Nématodes gastro-intestinaux ...

Procédures expérimentales
2.3. Etude quantitative et qualitative de la population parasitaire chez l’hôte (bilans
parasitaires)
L’analyse quantitative de la population de strongles chez l’hôte permet de calculer le taux
d’installation des larves infestantes grâce au nombre total de vers recueillis dans l’organe
cible, et donc de comparer l’installation entre races résistantes et sensibles, entre ovins
immunisés et naïfs, ou entre animaux d’un même groupe. A l’autopsie, l’organe cible de
l’infestation parasitaire (caillette pour H. contortus ; les cinq premiers mètres d’intestin grêle
pour T. colubriformis) sont isolés.
Pour chaque organe, les vers sont recherchés :
(i) dans le contenu de l’organe (ainsi que dans les lavages des parois de celui-ci),
(ii) mais également dans la paroi de l’organe, afin de récupérer et de dénombrer les
stades parasitaires non encore matures dans la muqueuse. Pour cela, l’organe
cible est digéré dans une solution d’acide chlorhydrique / pepsine pendant 6
heures à 37°C.
Ces différentes fractions sont filtrées dans un tamis à mailles de 40 µm afin d’éliminer les
débris alimentaires, puis préservées par addition d’un large volume d’éthanol 70° jusqu’à
analyse. Leur volume est ensuite ajusté à 1 litre et le nombre total de vers est estimé dans un
aliquot de 10%.
En parallèle du nombre total de vers, une analyse qualitative de la population de strongles est
réalisée en dénombrant les différents stades parasitaires : larves L4, vers immatures mâles et
femelles, vers adultes mâles et femelles. Cette analyse, lorsqu’elle est effectuée sur des
prélèvements en cinétique, permet d’apprécier le développement des vers sur la période
considérée, ainsi que la concordance ou non avec le schéma habituel de maturation larvaire.
2.4. Etude de la fécondité des femelles parasitaires adultes
Un des effets de la réponse immunitaire sur la population parasitaire est une diminution de la
fécondité des vers femelles. Cette fécondité peut être appréciée par deux paramètres :
- (i) la longueur totale des femelles,
- (ii) le nombre d’œufs parasitaires qu’elles contiennent dans leur utérus.
Lors des dénombrements des différents stades parasitaires, une vingtaine de femelles adultes
par animal sont prélévées et conservées dans de l’éthanol à 70°. Ces femelles sont, dans un
premier temps, mesurées, puis plongées dans une solution de sodium hypochloride 4%
jusqu’à complète désintégration. Cette étape a pour but de libérer les œufs de l’utérus de la
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