Régulation des populations de Nématodes gastro-intestinaux ...

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4.3. Isolement des cellules CD4 positives du nœud lymphatique abomasal pour extraction spécifique des ARN de cette fraction cellulaire.............................................91 4.4. De l’ARN à l’ADN complémentaire (ADNc)… .......................................................92 4.5. PCR quantitative....................................................................................................92 5. EXPLORATION DE LA REPONSE HUMORALE GENERALE GENERALE ET LOCALE............94 5.1. Collecte des prélèvements ......................................................................................94 5.2. Préparation des antigènes......................................................................................94 5.3. Détermination des conditions optimales pour l’ELISA ...........................................95 5.4. Technique ELISA ...................................................................................................98 6. ETUDE DE LA REPONSE CELLULAIRE LOCALE ..............................................................98 6.1. Histologie conventionnelle et immunohistochimie sur coupes en paraffine .............99 6.1.1. Collecte des prélèvements ...............................................................................99 6.1.2. Technique histologique ...................................................................................99 6.1.3. Colorations à l’Hémalun/Eosine et au Giemsa .................................................99 6.1.4. Immunohistochimie sur coupes en paraffine..................................................101 6.2. Immunohistochimie sur coupes en congélation.....................................................102 6.2.1. Collecte et technique des prélèvements..........................................................102 6.2.2. Immunohistochimie.......................................................................................102 7. ETUDE DE LA LYMPHOPROLIFERATION SPECIFIQUE D’ANTIGENES PARASITAIRES.....103 7.1. Principe ...............................................................................................................103 7.2. Technique ............................................................................................................104 7.2.1. Préparation des cellules .................................................................................104 7.2.2. Mise en culture et stimulation des cellules mononucléées..............................104 7.3. Interprétation des résultats ..................................................................................105 8. ANALYSES STATISTIQUES ...........................................................................................105 CHAPITRE V : RESULTATS.........................................................................................107 PARTIE I : ETUDE DE LA REPONSE IMMUNITAIRE ADAPTATIVE CHEZ DES AGNEAUX DE RACE SENSIBLE, INRA 401, INFESTES PAR H. CONTORTUS OU T. COLUBRIFORMIS...........................................................................................................108 ARTICLE I :HAEMONCHUS CONTORTUS (NEMATODA : TRICHOSTRONGYLIDAE) INFECTION IN LAMBS ELICITS AN UNEQUIVOCAL TH2 IMMUNE RESPONSE........................................111 6
ANNEXE A L’ARTICLE « HAEMONCHUS CONTORTUS (NEMATODA : TRICHOSTRONGYLIDAE) INFECTION IN LAMBS ELICITS AN UNEQUIVOCAL TH2 IMMUNE RESPONSE »....................................................................................................................127 ARTICLE II : IMMUNE RESPONSES IN LAMBS INFECTED WITH TRICHOSTRONGYLUS COLUBRIFORMIS..............................................................................................................131 PARTIE II : ETUDE COMPARATIVE DE LA REPONSE IMMUNITAIRE ADAPTATIVE CHEZ DES AGNEAUX DE RACE RESISTANTE, BARBADOS BLACK BELLY, ET DE RACE SENSIBLE, INRA 401, INFESTES PAR H. CONTORTUS....................................................................................................................165 ARTICLE III : DYNAMICS OF THE ADAPTIVE IMMUNE RESPONSE TO HAEMONCHUS CONTORTUS IN SUSCEPTIBLE INRA 401 AND RESISTANT BARBADOS BLACKBELLY LAMBS .......................................................................................................................................167 CHAPITRE VI : DISCUSSION GENERALE................................................................197 1. REGULATION DES POPULATIONS DE NEMATODES CHEZ L’HOTE.................................198 1.1. Variations selon le parasite au sein de la race INRA 401 .....................................198 1.2. Variations selon la race pour un même parasite : Haemonchus contortus............199 2. L’IMPLICATION DE LA REPONSE IMMUNITAIRE ADAPTATIVE DANS LA REGULATION DES POPULATIONS DE NEMATODES GASTRO-INTESTINAUX....................................................200 2.1. Orientation de la réponse immunitaire adaptative : variations selon l’espèce de parasite considérée.....................................................................................................200 2.2. Orientation de la réponse immunitaire adaptative : variations selon la race ovine considérée ..................................................................................................................202 2.3. Rôle des mécanismes effecteurs dans la protection contre les nématodes gastro- intestinaux ..................................................................................................................202 3. PERSPECTIVES DANS LA COMPREHENSION DE LA RESISTANCE ...................................205 3.1. Le rôle de la réponse immunitaire innée...............................................................205 3.2. Régulation de la réponse immunitaire adaptative.................................................206 3.3. L’exploration de la résistance : aspects génétiques et identification de gènes candidats ....................................................................................................................207 4. CONCLUSION..............................................................................................................208 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ........................................................................210 7
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