Régulation des populations de Nématodes gastro-intestinaux ...

Procédures expérimentales
femelle. Leur paroi étant relativement épaisse, ils résistent plus facilement à la désintégration
dans la solution d’eau de Javel que le corps de la femelle, et peuvent ainsi être dénombrés
(Kloosterman et al ., 1978).
3. ETUDE DE PARAMETRES PHYSIOPATHOLOGIQUES CHEZ L’HOTE
3.1. Suivi de l’éosinophilie sanguine
La réponse d’un hôte face à une infestation par un helminthe se manifeste à différents
niveaux, et notamment par une hyperéosinophilie sanguine suivie d’une infiltration
éosinophilique de la muqueuse de l’organe infesté. Le suivi de cette éosinophilie permet :
- de vérifier l’efficacité de l’infestation des larves administrées chez l’hôte et ce, dès
le 7 ème jour,
- d’étudier l’intensité et la précocité de la réponse de l’hôte et de la comparer entre
différents groupes expérimentaux ou différentes races ovines.
L’éosinophilie sanguine (ou nombre de polynucléaires éosinophiles par mL de sang total) est
déterminée selon la méthode de Dawkins et al. (1989).
Le sang de l’hôte est prélevé à la jugulaire sur un tube contenant un anti-coagulant (EDTA) ;
ces tubes peuvent être conservés jusqu’à 4 jours à 4°C. Dans un premier temps, une solution
d’éosine est préparée dans les proportions suivantes :
- 2 mL d’Eosine 2% (Eosin Y, Sigma)
- 3 mL de formaldéhyde saturé en CaCO3 (Rectapur, Prolabo)
- 95 mL d’eau
Dans un tube à hémolyse, sont mélangés 900 µL de solution d’éosine et 100 µL de sang total.
Ce mélange est homogénéisé afin de colorer tous les polynucléaires éosinophiles. Un volume
de 20 µL de ce mélange est déposé sur une lame Fast Read (ISL, Royaume-Uni). La lecture et
le comptage sont effectués au microscope au grossissement 400. Les polynucléaires
éosinophiles sont reconnaissables à leur taille (15 µm environ), leur noyau généralement
bilobé et leur cytoplasme chargé de fines granulations éosinophiles (rose vif).
3.2. Suivi de l’hématocrite
Haemonchus contortus est un parasite hématophage capable d’entraîner chez son hôte une
anémie plus ou moins sévère, parfois létale. Cet impact négatif du parasite sur son hôte peut
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