Workshop Extensão 2008 Areia - PB - CCA/UFPb - Universidade ...

Cultura de segmentos nodais – estes segmentos são constituídos de gemaslaterais isoladas, segmentos de caule com uma ou múltiplas gemas. Sendo quecada gema se desenvolve e forma uma única brotação. Cultura de embriões – esta cultura compreende o isolamento e crescimento deembriões zigóticos extraídos de sementes, visando a obtenção de plantas viáveise formação de brotos.7. PROCEDIMENTOS7.1. Preparo e esterilização do meio de cultura – para o preparo do meio de cultura, assoluções-estoque devem estar em concentrações mais elevadas para facilitar oprocedimento. Mistura-se água deionizada com todas as soluções-estoque, juntamentecom as vitaminas e a sacarose; em seguida verifica-se o pH da solução, sendo este +5,7; avoluma-se a solução; acrescenta-se o Agar e verte no forno microondas o meio;distribui-se o meio nos recipientes e os leva para a autoclave, onde será esterilizadofisicamente por 20 minutos a 120°C.7.2. Desinfestação dos explantes – para este procedimento são utilizados compostos abase de cloro, ácidos ou bases concentradas, juntamente com algumas gotas de umdetergente a base de cloro para melhorar o contato com os tecidos. A concentração, osprincípios ativos e o tempo de exposição são fatores que variam muito, dependendo dasensibilidade do tecido a ser desinfetado, portanto utiliza-se a maneira de inversãoproporcional da concentração com o tempo de exposição. Depois de desinfestado omaterial vegetal em soluções germicidas, este é lavado em água destilada, deionizada eautoclavada, estando pronta para a inoculação.7.3 Isolamento do explante – este procedimento deve ser realizado somente em capelade fluxo laminar, pois nela, o explante fica livre da ação de patógenos. Nesta parte, temque se tomar cuidado com o manuseio. Todos os instrumentos devem estar esterilizadospara evitar a contaminação.7.4 Incubação – as condições de incubação variam muito. Logo nos primeiros dias deisolamento, o escuro total ou intensidades de luz reduzidas são úteis para diminuir oefeito da oxidação fenólica, como também para evitar o estresse nos explantes, quequando estavam na planta, não eram expostos a luz.7.5 Transplantio e aclimatação – esta etapa envolve a transferência da planta in vitropara a casa de vegetação, sendo submetido à aclimatação e endurecimento. Esta é a