ÐÐÐÐТÐÐРЧÐÐÐÐÐÐÐ - ÐÐУ. Ð¡Ð°Ð¹Ñ Ð±Ð¸Ð¾Ð»Ð¾Ð³Ð¸ÑеÑкого ÑакÑлÑÑеÑа
ÐÐÐÐТÐÐРЧÐÐÐÐÐÐÐ - ÐÐУ. Ð¡Ð°Ð¹Ñ Ð±Ð¸Ð¾Ð»Ð¾Ð³Ð¸ÑеÑкого ÑакÑлÑÑеÑа
ÐÐÐÐТÐÐРЧÐÐÐÐÐÐÐ - ÐÐУ. Ð¡Ð°Ð¹Ñ Ð±Ð¸Ð¾Ð»Ð¾Ð³Ð¸ÑеÑкого ÑакÑлÑÑеÑа
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
2.2.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом человека<br />
2.2.1.1. Биологический материал, используемый для приготовления<br />
метафазных хромосом человека<br />
Препараты хромосом можно приготовить из всех тканей и клеточных<br />
суспензий, содержащих делящиеся клетки. У человека в большинстве<br />
случаев используют препараты из клеток костного мозга,<br />
кратковременной культуры крови или из длительной культуры фибробластов.<br />
Наиболее простым и доступным является метод культивирования<br />
клеток крови. Пункция костного мозга или биопсия кожи для<br />
культивирования фибробластов технически сложнее, и к тому же аспирация<br />
костного мозга - весьма неприятная процедура. Препараты из<br />
костного мозга имеют, однако, то преимущество, что дают возможность<br />
изучать митозы in vivo.<br />
В крови здоровых людей (или больных, но не лейкозами) нет делящихся<br />
клеток. Однако митоз этих клеток можно стимулировать искусственно,<br />
например, обработав их фитогемагглютинином. Спустя один<br />
час после инкубации с фитогемагглютинином в лимфоцитах крови отмечается<br />
синтез РНК, а через 24 ч начинается синтез ДНК. Суспензию<br />
лимфоцитов выращивают в культуральной среде 72 ч и затем готовят<br />
препараты хромосом. Чтобы остановить клетки в прометафазе, подавляют<br />
образование веретена деления веществами с колхициноподобным<br />
действием, предпочтительно колцемидом. В специальных условиях<br />
время культивирования можно сократить до 48 ч. Для свободного распределения<br />
хромосом в плоскости препарата клетки обрабатывают в<br />
течение 10-30 мин гипотоническим раствором, а затем фиксируют смесью<br />
этанола и уксусной кислоты. Каплю такой суспензии наносят на<br />
стекло, высушивают на воздухе и окрашивают.<br />
Препараты клеток костного мозга получают из материала пункции<br />
грудины или подвздошной кости. Клетки культивируют только 2 ч с<br />
колцемидом. Процедура приготовления препаратов несколько отличается<br />
от процедуры, описанной выше. Культуру фибробластов получают<br />
из материала биопсии кожи. Ее измельчают и выращивают в культуральной<br />
среде таким образом, чтобы кусочки были прикреплены к<br />
поверхности культурального сосуда. Через 10 дней культивирования<br />
клетки начинают расти по поверхности этого сосуда, а через<br />
21 день можно уже готовить суспензию и делать препараты.<br />
В конце 70-х годов прошлого столетия был предложен оригинальный<br />
57
Change language