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Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes
Morphologie der Zellen und dem Anteil adhärenter Zellen an der Gesamtzellmenge überprüft.
Differenzierte Neutrophilen-ähnliche Zellen sind segmentkernig, etwas kleiner als
undifferenzierte Zellen und adhärent. Die Morphologischen Unterschiede zwischen
differenzierten und undifferenzierten Zellen sind in Abbildung 8 dargestellt.
Abbildung 8:Morphologisches Erscheinungsbild von (A) undifferenzierten HL-60 Zellen und (B) HL-60
Zellen nach 6 Tagen in 60mM DMSO. [Wright-Giemsa Färbung, Collins, 1978]
Es wurden durchwegs bessere Ergebnisse erzielt, wenn die Zellen während der
Differenzierung nach 2-3 Tagen durch Zentrifugieren bei 1500 RPM für 5min vom
übersäuerten Medium getrennt und anschließend in frischem Medium resuspendiert wurden.
Nach demselben Prinzip wurden die Zellen nach erfolgter Differenzierung vom Medium
getrennt, mit 5ml PBS gewaschen und in 175 µl Hanks Buffered Salt Solution aufgenommen,
um eine finale Konzentration von 1,7x10 7 Zellen zu erhalten. Ausgehend von dieser Lösung
konnten Chemotaxis-Experimente an den Zellen durchgeführt werden.
3.2.2. Kultivierung von HT-1080 Zellen
Für die Chemotaxisexperimente an HT-1080 Fibrosarkom-Zellen wurden anfangs Zellen vom
Wildtyp verwendet. Etwa ab der Hälfte der durchgeführten Versuche wurde mit einer mit
LifeAct-tag RFP transfizierten Variante gearbeitet. Hierbei ist anzumerken, dass die
transfizierten Zellen etwa um den Faktor 1,5 erhöhte Generationszeiten aufweisen. Das
Vorgehen bei der Kultivierung und das Verhalten in Chemotaktisexperimenten waren jedoch
für beide Zellinien identisch.
HT-1080 Wildtyp Zellen wurden in Passage 11 übernommen, die LifeAct-tag RFP
transfizierten Zellen wurden ab Passage 2 weitergeführt. Beide Zelllinien wurden in 75 cm 2
3.Material und Methoden 22