Download - Fakultät 06

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes
Minuten zustande kommt, die in die Formel für die Berechnung des FMI mit einfließt. Nach
etwa 30 Minuten gestaltet sich der Verlauf des FMI aber konstant, was darauf schließen lässt,
dass auch Experimente mit schnellen Zellen und über einen kurzen Zeitraum keiner
anfänglichen Wartezeit bedürfen.
Anhand der Morphologie der Zellen kann geschlossen werden, dass die Migration der Zellen
innerhalb der Matrix stattfindet und nicht entlang der Kanaldecke oder des Bodens.
Die spindelförmige Form während der Bewegung und der rundliche Zellkörper ohne den, bei
adhärenten Zellen sichtbaren Adhäsionsfilm um die Zelle, sind Zeichen dafür, dass die
Bewegung der Zellen durch Anpassung an die Gelmatrix erfolgt.
Obwohl es bis zum Ende des Versuchszeitraumes nicht gelungen ist, Migrationsexperimente
von HL-60 in Gelmatrizes mit durchwegs eindeutigen Ergebnissen zu reproduzieren,
gestaltete sich die Arbeit mit dieser Zellinie vielversprechend. Es ist zu erwarten, dass durch
die gewonnenen Erkenntnisse die Möglichkeit besteht, mit etwas zusätzlichem Aufwand
reproduzierbare Chemotaxis-Assays mit HL-60 Zellen zu entwerfen, die stellvertretend für
Versuche mit schnellen Zellen gesehen werden können.
Die Versuche mit dem LifeAct-tag haben einen ersten Blick in die Vorgänge im Inneren der
Zellen während der gerichteten Migration ermöglicht. Dabei scheint sich die Dynamik der
Umlagerung des Aktingerüsts zwischen HT-1080 Zellen und HL-60 Zellen merklich zu
unterscheiden, wie die Betrachtung der unterschiedlich starken Polarisation der Zellen zeigt.
Es wäre möglich, dass dieser Effekt auf die, unter Punkt 1.3. beschriebenen, unterschiedlichen
Migrationsmodi der beiden Zelllinien zurückzuführen ist, wonach langsame, integrin-
vermittelt migrierende Zellen wie HT-1080, weit weniger polarisieren, als schnelle,
vermutlich Integrin-unabhängig agierende Zellen wie HL-60 [Even-Ram, 2005]. Das geringe
Volumen der vorhandenen Daten erlaubt allerdings keine weitere Einschätzung dieser
Beobachtung.
Die Probleme bei der Bereitstellung der richtigen Migrationsparameter für HL-60 Zellen und
der kurze Zeitraum, in welchem transfizierte HT-1080 Zellen für Versuche zur Verfügung
standen, führten dazu, dass das Potential dieser Methode im Rahmen dieser Arbeit nicht
annähernd ausgeschöpft werden konnte. Die unter Punkt 4.2.3. vorgestellten Ergebnisse
vermitteln jedoch einen ungefähren Eindruck, auf welcher Ebene Chemotaxis Experimente in
naher Zukunft ausgewertet werden können.
5. Diskussion und Ausblick 70