Download - Fakultät 06

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes
Veränderung der z-Koordinate kann die Betrachtungsebene auf die Grenzfläche zwischen den
Materialien eingestellt werden. Ein programmierbarer definierter Schritt von 20 µm in den
Innenbereich des Kanals stellt, bei einer Gesamthöhe des Kanals von 70 µm, die Lage der
Messebene im mittleren Kanalbereich sicher.
Abbildung 19: Lage der konfokalen Schnittebene in einer Kammer der Chemotaxis 3D µ-Slide. Im
Querschnitt des Kanals ist die Platzierung der Gelmatrix (braune Struktur) angedeutet.
C100 steht stellvertretend für eine hohe Konzentration an Fluoreszenzfarbstoff, C0 für eine geringe.
Die Konzentration der Fluoreszenz-Farbstoffe wurde nach Anhaltspunkten bestimmt wie im
Vorexperiment unter 4.1.1. beschrieben. Die Grauwertdarstellung der Fluoreszenzintensität
sollte möglichst wenige unter- beziehungsweise überbelichtete Pixel enthalten, um einen
Informationsverlust zu vermeiden. Für FITC-Dextran wurde C100 auf 0.1mg/ml und C0 auf
0.01mg/ml festgelegt. Alexa 488 wurde unter C100 auf 1µM verdünnt und unter C0
entsprechend auf 0.1µM.
Die Proben wurden mit kohärentem Licht von 488nm Wellenlänge aus einem Argon/2 Laser
mit 25% Output einer Maximalleistung von 30mW und einem Tube Current von 4.9 A
angeregt. Der Lichtquelle war ein Transmissionsfilter mit 50% Durchgang nachgestellt. Nach
Anregung des Farbstoffes wurde das emittierte Licht durch einen Emissionsfilter auf 505nm
Wellenlänge gefiltert und anschließend detektiert. Das Bildfeld wurde mit einer Pixelzeit von
6.4µs zeilenweise 2-fach abgetastet. Einem Gesamtprofil von 30 Bildern steht mit den
Fahrzeiten des automatischen Tisches ein Zeitaufwand von etwa 4 Minuten entgegen. Wird
der Wechsel des Slides und die nachfolgende Kalibrierung der Messposition beaufschlagt,
ergibt sich eine Zeitauflösung von etwa 15 Minuten für parallele Messungen in mehreren
Slides.
4. Ergebnisse 41