Download - Fakultät 06
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Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes<br />
37°C entsprach. Durch einen Gasmischer kombiniert mit einem System zur Erhöhung der<br />
Luftfeuchte, wurde Luft mit 5% CO2 in die Heizkammern geleitet. Die Bilddaten wurden auf<br />
dem unter 3.3.1.1. beschriebenen Phasenkontrastmikroskop generiert.<br />
Zur genauen Positionierung der Kammern und um Daten für Experimente in mehreren<br />
Kammern parallel erzeugen zu können, wurde ein software-gesteuerter automatischer Tisch<br />
mit programmierbarer Positionsliste genutzt. Die Zeitrafferaufnahmen wurden unter<br />
Verwendung der, auf dem Programm ImageJ basierenden Software, Micromanager Version<br />
1.4 erzeugt. Für HT-1080 Zellen war der Beobachtungszeitraum in der Regel über 24<br />
Stunden, bei einem Aufnahmeintervall von 10 Minuten. HL-60 Zellen wurden 3 Stunden lang<br />
bei einem Aufnahmeintervall von 1 Minute beobachtet.<br />
3.5.2. Auswertung und Datenanalyse<br />
Zell-Tracking<br />
Die Bilddaten aus den Versuchen wurden mit dem Manual-Tracking Plugin des Programms<br />
ImageJ ausgewertet. Dazu wurde die Bilderserie des Experiments in den Zwischenspeicher<br />
des Programms geladen. Bei Verwendung des Manual-Tracking Plugin wurden für jedes Bild<br />
nacheinander die Zentren der einzelnen Zellen mit dem Cursor markiert, so dass die Software<br />
nach Abschluss einer Bilderserie daraus die Spur der Zellbewegungen darstellen konnte.<br />
Das Ergebnis des Manual Tracking ist in Abbildung 16 beispielhaft dargestellt.<br />
Abbildung 16: Vergleich der Phasenkontrastbilder unmittelbar nach Start des Experiments und nach 50<br />
Minuten mit farbig markierten Zellspuren.<br />
3.Material und Methoden 34