Download - Fakultät 06

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes
3.5. Chemotaxis mit HL-60 und HT-1080
3.5.1. Durchführung der Experimente
Zur Chemotaxis-Analyse wurden 6 µl der jeweiligen Zellen in einer Gelmatrix in die Kanäle
des µ-Slides Chemotaxis 3D gefüllt. Nach der Polymerisationszeit des Gels wurde
Chemoattraktant in die Reservoire der Slides gefüllt. Das genaue Vorgehen bei dem Befüllen
der Slides ist in Anhang E auf Seite 97 beschrieben. Das Befüllschema war hier jeweils
abhängig davon, welche Parameter bei dem Experiment untersucht wurden.
Zur Ermittlung der notwendigen Konzentration an Chemoattaktand wurden die linken
Reservoire der Kammern mit einer steigenden Chemoattraktand Konzentration befüllt. Die
Aufteilung der verschiedenen Chemoattraktant-Konzentrationen ist in Abbildung 14
schematisch dargestellt.
Abbildung 14: Schematische Darstellung der Verteilung der Chemoattraktant Konzentrationen auf die
Kammern des µ-Slides Chemotaxis 3D zur Ermittlung der einzusetzenden Dosis.
Um bei einer festgelegten Konzentration von Chemoattraktant die Chemotaxis-Analyse gegen
zufällig auftretende Effekte abzusichern, wurde ein Vergleich mit einer Positiv- und einer
Negativkontrolle durchgeführt. Die Positivkontrolle beinhaltet die Verwendung einer Lösung
mit hoher Konzentration an Chemoattraktant in beiden Reservoirs. Die Negativkontrolle wird
mit chemoattraktant-freiem Medium in beiden Reservoirs durchgeführt.
3.Material und Methoden 32