Download - Fakultät 06

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes
1.4. Analytische Verfahren
Die fortlaufende Veröffentlichung neuer Erkenntnisse auf dem Gebiet der Zellmigration und
Chemotaxis erfordert die stetige Entwicklung neuer, dem Fokus des Interesses angepasster
Methoden. Im Folgenden soll ein kurzer Überblick über die Entwicklung der
Analysemethoden in den vergangenen Jahren gegeben werden.
1.4.1. Entwicklung analytischer Verfahren
Eines der ersten Systeme zur Analyse des chemotaktischen Potentials verschiedener
Substanzen und zugleich der Pionier einer andauernden Entwicklung sogenannter 2-Kammer
Systeme, war die von Steve Boyden entwickelte Boyden-Kammer [Boyden, 1962]. Das
zugrunde liegende Prinzip dieser Systeme sind 2 Flüssigkeitsreservoirs, von denen eines mit
dem zu untersuchenden Stoff und das andere mit Referenzlösung gefüllt ist. Im Fall der
ursprünglichen Boyden-Kammer werden die beiden Flüssigkeiten durch eine Membran
getrennt, deren Porengröße so gewählt wurde, dass darauf liegende Zellen sie nur durch
aktive Migration überwinden können. Später wurde das System dahingehend modifiziert, dass
man die poröse Membran durch eine Gelmatrix ersetzte, welche die Zellen durchwandern
mussten, um in Richtung der höheren Chemoattraktant Konzentration zu gelangen.
Der Aufbau einer modifizierten Boyden-Kammer ist in Abbildung 3 schematisch dargestellt:
Abbildung 3: Modifizierte Boyden-Kammer mit Gelmatrix. C0 entspricht Medium ohne Chemoattraktant,
C100 Medium mit Chemoattraktant.
Ausgewertet wird in beiden Verfahren rein statistisch durch die Ermittlung der Zellzahl auf
der Unterseite der Membran (für adhärente Zellen) und/oder in den beiden Reservoiren (für
Suspensionskulturen).
1.Einleitung und Motivation 11