Download - Fakultät 06

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes
verhindern. Die Herstellung des Gels ist im Folgenden stichpunktartig beschrieben:
- Mischen des lyophilisierten Pulvers mit 600µl des mitgeliefertern Buffer A.
- Vortexen der Lösung für etwa 10 Sekunden.
- Hinzufügen von 150 µl Zellsuspension mit einer Zellzahl von 1.5x10 7 /ml.
- Vortexen für 10-15 Sekunden zur vollständigen Homogenisierung der Lösung.
- Einfüllen von 6µl Gelsuspension in den Kanal des µ-Slide.
- Polymerisation des Gels für 30-45 Minuten im Brutschrank bei 37°C und 5% CO2.
Die finale Zellkonzentration in den Kanälen betrug 3x10 6 Zellen/ml. Eine vollständige
Tabelle zu den unterschiedlichen Verdünnungen und den mechanischen Eigenschaften des
Gels findet sich in Anhang A auf Seite 95.
Cellendes Maleimid-BSA 3D-Matrix:
Das verwendete Hydrogel der Firma Cellendes ist eine Matrix aus BSA-Protein mit
funktionellen Maleimid-Gruppen.
Abbildung 12: Schematische Darstellung des BSA-Proteins mit funktionellen Maleimid-Gruppen
[modifiziert aus: Cellendes – Hydrogel User Guide Version 3.0, 2011]
In der untersuchten Ausführung wurden diese Maleimid-Gruppen mit Thiol-Gruppen eines
Polyethylen-glycol Proteinkomplexes quervernetzt. Der Proteinkomplex enthält eine Sequenz,
welche die Zellen bei der Migration durch MMP-Proteasen spalten können.
Abbildung 13: Schematische Darstellung des PEG-Crosslinkers mit funktionellen Thiol-Gruppen und
spaltbarer Peptidsequenz. [Cellendes – Hydrogel User Guide Version 3.0, 2011]
3.Material und Methoden 30