Download - Fakultät 06

Jürschick, Johannes – Chemotaxis in µ-Slides mit 3-dimensionalen Gelmatrizes
Zur vollständigen Vernetzung des Collagens wurden die Slides anschließend wieder für 30
Minuten in den Inkubator gestellt.
Die auszuwertenden Bilddaten wurden mit dem EVOS fl. Fluoreszenz-Mikroskop der Firma
AMG generiert. Die Wellenlänge des anregenden Lichts betrug 470nm, die des detektierten
emittierten Lichts 525nm. Als Referenzwert für die anschließenden Messungen wurde die
Hintergrundfluoreszenz des Collagen-Gels festgelegt. Zur Bestimmung der
Hintergrundfluoreszenz wurde die Detektionszeit und die Intensität des anregenden Lichtes
variiert bis unter dem integrierten Fluorit-Objektiv (10x/0.3) ein deutlicher Unterschied der
Emissionsintensität zwischen der Messung im Collagen-Gel und einer Referenzmessung in
einem leeren Reservoir erkennbar war. Die Werte betrugen im untersuchten Fall 500ms
Belichtungszeit bei 50% der, zur Verfügung stehenden Anregungsintensität des Mikroskops.
Über Verdünnungsreihen der beiden verwendeten Fluoreszenz-Farbstoffe wurden diejenigen
Konzentrationen ermittelt, bei denen die, als 8-bit Grauwert auf einer Skala von 0 (Schwarz)
bis 255 (Weiß) dargestellte Emissionsintensität etwa im mittleren Bereich lag.
Für FiTC-Dextran ergab sich in Folge dessen eine Konzentration von 1µg/ml, für Alexa 488
wurde eine 100nM Lösung gewählt.
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