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Analytik «
» Methode zur
Bestimmung von
Melamin «
unter Rühren 30 min bei 70 °C extrahiert.
Zusatz von 5 ml Trichloressigsäure-Lösung
(10 %) und Auffüllen auf 50 ml.
Lösung (ca. die Hälfte) wird in ein verschließbares
Kunststoffgefäß überführt
und (ggf. über Nacht) bei ca.
–20 °C eingefroren. Dieser Schritt hat
sich sehr bewährt, um Störsubstanzen
als stabile Niederschläge abzutrennen.
Nach vollständigem Auftauen und
Durchmischen der Lösung (wichtig,
Phasentrennung möglich!) erfolgt Abfüllung
in Eppendorffzentrifugengefäß
und Zentrifugation bei 4 °C 10 min
bei 14000 rpm.
Vom Überstand der Probelösung wird
1:10 verdünnt und diese Lösung der
HPLC-Messung zugeführt.
HPLC-MS-MS
Als Gerätestandard werden zu 1 ml Verdünnung
50 µl einer Lösung von stabilisotopen-markiertem
Melamin geben ( 13C15N markiert, 10 ng/ml). Die Chromatographie
wird an einer ZIC ® -pHILIC-Phase durchgeführt.
Diese Säule liefert spezifi sche Retentionszeiten
für die untersuchten Substanzen
und ermöglicht störungsfreie
Chromatogramme in Extrakten mit minimalem
Vorbereitungsaufwand.
HPLC-Säule: ZIC-pHILIC, 5 µm,
100 × 2,1 mm
FließmittelA: 10 mMol/l Ammoniumacetat,
pH 7,2
Fließmittel B: Acetonitril
Gradient von 3% A bis 20% A in etwa
10 min, danach Spülen mit 55% A.
Die Fließgeschwindigkeit beträgt 0,3 ml/
min.
Validierung
Neben der Überprüfung der Linearität
wurden Wiederfi ndungsversuche in ver-
schiedenen Matrices (Sojaprotein, milch-
freie Spezialnahrung, Süßwaren usw.)
durchgeführt. Für Melamin ergaben sich
Wiederfi ndungsraten zwischen 60 und
110 %, für die anderen Verbindungen
waren die Wiederfi ndungen ähnlich. Die
Quantifi zierung erfolgt über eine Stan-
dardaddition zur Probe in vergleichbarer
Konzentration.
Die Nachweisgrenze ist abhängig von Probeneinwaage
und Verdünnungen. Für
Melamin wird bei 0,5 g Probeneinwaage
eine Nachweisgrenze