Caracterización química de fibras de plantas herbáceas utilizadas ...

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3. Materiales y métodos extracto lipídico de las fibras se fraccionó por un procedimiento SPE desarrollado por Gutiérrez et al. (1998) en cartuchos (500 mg) con fase aminopropilo (Waters, Millipore). El extracto seco (5-10 mg) se suspendió en un volumen mínimo (
3. Materiales y métodos 3.2.1.5. Cromatografía de gases (GC) Los análisis cromatográficos de los extractos se llevaron a cabo en un cromatógrafo de gases Hewlett-Packard HP-5890 equipado con un detector de ionización de llama (FID) y una columna capilar corta de sílice fundida (DB-5HT, J&W; 5 m x 0,25 mm ID, espesor de película 0,1 µm). El programa de calentamiento del horno empezó a 100°C (1 min), seguido de un incremento de temperatura hasta 350°C (3 min) a 15°C/min. La temperatura del inyector y del detector se mantuvieron a 300°C y 350°C, respectivamente. El gas portador fue helio y la inyección se realizó en modo splitless. 3.2.1.6. Cromatografía de gases/espectrometría de masas (GC/MS) El análisis por GC/MS se llevó a cabo en un cromatógrafo de gases Varian Star 3400 acoplado a un detector de trampa de iones (ITD, Varian Saturn 2000), usando una columna capilar de sílice fundida (DB-5HT, J&W; 12 m x 0,25 mm ID, con espesor de película de 0,1µm). El horno se calentó de 120°C (1 min) a 380°C (5 min) a 10°C/min. La línea de transferencia se mantuvo a 300ºC. La temperatura del inyector se programó de 120ºC (0,1 min) a 380°C con una rampa de 200ºC/min y manteniéndose hasta el final del análisis. Se usó helio como gas portador. La identidad de cada componente se determinó por comparación de sus espectros de masas con los de sustancias patrones inyectados en las mismas condiciones, con los existentes en librerías (Wiley, NIST), con espectros publicados anteriormente y por los tiempos de retención. 3.2.1.7. Métodos de derivatización Muchos compuestos orgánicos no pueden analizarse en condiciones óptimas por GC debido a su baja volatilidad y/o inadecuada separación en columnas de poca polaridad. En estos casos es necesario recurrir a métodos de derivatización para hacerlos más volátiles. Las técnicas empleadas en este trabajo incluyeron la metilación de grupos carboxilo y la silanización de grupos hidroxilo. Metilación con (trimetilsilil)diazometano. Se usó para metilar los grupos carboxílicos de ácidos grasos libres, hidroxiácidos, etc. Este método también metila los grupos fenólicos. Una vez seca la muestra, se añadió 0,1 ml de metanol y 0,025 ml de una solución de trimetilsilil diazometano 2,0 M en hexano, se mantuvo 20 min en el baño de ultrasonidos. A continuación se evaporó con nitrógeno hasta sequedad, para resuspenderla en cloroformo y analizarla por GC/MS. Silanización con N,O-bis-(trimetilsilil)-trifluoroacetamida (BSTFA). Se usó para silanizar los grupos hidroxilo de alcoholes, esteroles, etc. Una vez seca la muestra, se añadió 0,1 ml de BSTFA y 0,2 ml de piridina. A continuación se 34
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