Caracterización química de fibras de plantas herbáceas utilizadas ...

3. Materiales y métodos
calentó a 70ºC durante 2 h y se evaporó la mezcla con nitrógeno hasta sequedad.
Posteriormente, se redisolvió en cloroformo para analizarla por GC/MS.
3.2.1.8. Métodos de cuantificación
En el presente estudio se utilizaron patrones externos para la cuantificación de
los extractos lipofílicos. Para ello se usó una mezcla de compuestos (nonadecano,
ácido palmítico, sitosterol, oleato de colesterol y trioleína) a una concentración de
0,2 mg/ml. Dicha mezcla de patrones se inyectó en las mismas condiciones
cromatográficas que los extractos lipídicos de las fibras estudiadas. Las áreas
obtenidas tras la inyección del patrón se extrapolaron respecto a la concentración
de patrón inyectada y se compararon con las correspondientes a cada compuesto en
las muestras problema.
3.2.2. Determinación de la fracción hidrosoluble
El porcentaje de los compuestos hidrosolubles se determinó según la norma
Tappi T 207 om-88. Para ello, los cartuchos con las muestras de fibras tras la
extracción con acetona, una vez secos, se colocaron en matraces con 100 ml de
agua destilada y se tuvieron en un baño a 100ºC durante 3 h, al cabo de las cuales
el extracto se concentró en rotavapor y se secó a 100ºC para su determinación
gravimétrica.
3.2.3. Determinación de la lignina Klason o lignina ácido-insoluble
La lignina Klason se determinó según la norma Tappi 222- om88, con algunas
modificaciones. Para ello, las fibras libres de extraíbles e hidrosolubles (300 mg) se
hidrolizaron con ácido sulfúrico al 72% (p/p), a 30ºC durante 1 h en frascos pyrex.
Posteriormente, las soluciones se diluyeron con agua destilada hasta alcanzar una
concentración de ácido sulfúrico del 4%, y se tuvieron durante 1 h a 110ºC. Una
vez enfriados, se filtraron a través de filtros de vidrio poroso (Vidra FOC 663/3),
previamente tarados (4 h a 100ºC). Los primeros 100 ml de los filtrados se
recogieron para el posterior análisis de los azúcares libres. La lignina Klason se
retuvo en los filtros de vidrio poroso. El residuo (lignina Klason) se lavó con agua
destilada hasta pH neutro y se secó a 100ºC, durante 4 h. Los porcentajes de lignina
Klason se calcularon por diferencia de peso. El contenido en cenizas de la lignina
Klason se determinó mediante la norma Tappi 211 om-85 tal como se describe para
la fibra (ver apartado 3.2.7). Dicho contenido fue deducido del porcentaje total de
lignina presente en las muestras.
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