SEIX 17-20 octobre 2005 - Atelier Calcium

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grands que l‟angle critique. Cela résulte en une réflexion totale interne qui crée des ondes évanescentes directement adjacentes à l‟interface lamelle/spécimen. La structure unique en strate extensible du microscope inversé TE2000 de Nikon permet le montage simultané des systèmes TIRF et d‟illumination en épi-fluorescence, sans aucune restriction de leurs capacités individuelles. Cela autorise également l‟utilisation indépendante de leurs propres filtres. De plus, switcher de l‟un à l‟autre système est élémentaire. Nouveau TIRF Single Layer Nikon a profité de ses particularités techniques pour mettre au point un système d‟ondes évanescentes utilisable en routine sans contraintes. Le nouveau modèle d‟illuminateur TIRF permet sur un seul « étage » de coupler le TIRF et l‟épi fluorescence classique dans le but de mettre à profit le second étage laissé disponible pour d‟autres techniques telles la PA-GFP, les pinces optiques etc. Ainsi, différentes techniques d‟illumination, non redondantes sont à présent, disponibles sur microscope unique, ce qui facilite l‟étude par différentes approches sur un même échantillon. Perfect Focus System NIKON : La révolution. Une des particularités du TIRF est l‟épaisseur de la section optique excitée par les ondes évanescentes, mais cela devient aussi une contrainte. En effet, si l‟on admet que l‟onde ne peut se propager au-delà des 200nm au contact de la lamelle, en utilisant un objectif 60x ouvrant à 1.45, la profondeur de propagation est inférieure ou égale à la résolution en z de l‟objectif. De ce fait la plus petite dérive en z résulte en une perte le plan de mise au point et dans le cadre du TIRF, une disparition d‟image. Cette dérive sera accrue par la durée de l‟expérience. Nikon répond à cette problématique grâce à sa dernière innovation, le PFS (Perfect Focus System). Ce système est fourni pour « pister » le plan de mise au point automatiquement en détectant la limite de surface entre la lamelle et le milieu aqueux grâce à une lumière proche infrarouge qui n‟interfère pas avec l‟observation générale. Ne contrôlant la mise au point que par « tracking » des fluctuations verticales d‟interface, ce système est indépendant des changements d‟états de l‟échantillon. 54
C B A Culture medium: ~1.35 Glass: 1.5 Water: 1.333 or Oil: 1.514 or Air: 1.0 Ce système disponible sur le statif inversé motorisé TE2000E, particulièrement adapté pour le TIRF, est aussi très performant dans toutes les applications sensibles aux vibrations, telles Time Lapse/vidéo-microscopie, Optigrid, microscopie confocale. 55
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