Sažeci 2. Hrvatskog kongresa medicinske biokemije - Klinički zavod ...

SUPEROKSID-DISMUTAZE U ERITROCITIMA
I. Salamunić
Odjel za laboratorijsku medicinsku dijagnostiku KB Split
07 - 13/P2
Da bi se spriječilo štetno djelovanje "slobodnih radikala" organizam
posjeduje nekoliko zaštitnih mehanizama. Jedan od zaštitnih mehanizama
su i enzimski antioksidansi. Najpoznatiji enzimski antioksidansi
jesu superoksid-dismutaze (SOD), katalaza (CAT) i glutation-peroksidaza
(GPX). Superoksid-dismutaza javlja se u nekoliko aktivnih oblika:
SODI (CuZnSOD) kojeg ima u eritrocitima i citosolu tkivnih stanica,
SOD2 (MnSOD) kojeg ima u mitohondrijima i SOD3 koji je izvanstanični
enzim i prisutan je u plazmi. U ovom radu ispitana je metoda
određivanja aktivnosti SOD u hemolizatu eritrocita. Korišteni su gotovi
reagensi Ransel (SD125; Randox labs.). Načelo metode: SOD katalizira
razgradnju superoksidnog radikala do vodikovog peroksida i molekularnog
kisika. Ksantin i ksantin-oksidaza stvaraju superoksidne radikale
koji reagiraju s 2-(4-jodofenil)-3-(4-nitrofenol)-5-feniltetrazolijevim
kloridom (INT) i stvaraju formazan. Katalitička koncentracija
SOD mjeri se stupnjem inhibicije ove reakcije. Uzorci krvi su oduzimani
s EDTA kao antikoagulansom. Od izdvojenih i ispranih eritrocita
pripremljen je hemolizat i određena je koncentracija hemoglobina u
uzorcima. Promjena apsorpcije prati se na 505 nm kao funkcija vremena
od 180 s u termostatiranoj kiveti na 37°C. Ispitana je nepreciznost
iz dana u dan za referentno područje (n = 15, CV = 7,4%) i patološko
područje (n = 15, CV = 10,5%) i nepreciznost u seriji za referentno
područje (n = 20, CV = 4,4%) i patološko područje (n =15, CV = 6,7%).
Standardna krivulja rađena je prije svake serije određivanja. Linearnost
zadovoljava samo u području inhibicije reakcije između 40% i
60%. Ispitana je stabilnost hemolizata na sobnoj temperaturi, na +4°C
i na -20°C. Iz dobivenih rezultata može se zaključiti da je metoda
pouzdana.
BIOCHEMIA MEDICA god. 6, br. 1, 1996 169