guía práctica de experimentos para - Ecologia e Gestão Ambiental

primer paso, posteriormente al muestreo del
agua, es la filtración de la muestra con el filtro
deseado (Aminot, Rey 2000). Todos los
procedimientos químicos y bioquímicos
requieren una formación adecuada; es
conveniente tener asistencia de laboratorio para
el proceso de análisis y mantenimiento de las
condiciones seguridad.
Concentración de Nutrientes. Las
determinaciones de las concentraciones de
macronutrientes son realizadas en agua de mar
filtrada; principalmente para las concentraciones
de nitrato, amonio, fosfato y silicato. Para el
análisis de macronutrientes pueden ser
utilizados una serie de métodos automáticos o
manuales. Es importante tener en cuenta que
algunos métodos y materiales no son los
indicados para aguas marinas y sí para el
análisis de agua dulce. Véase Grasshoff et al.
(1983) como libro de referencia para diferentes
procedimientos en el análisis de agua marina.
Clorofila a. Existen una serie de métodos para
medir los niveles de Clorofila a (Chl a). Puede
ser realizadas mediciones in vivo en un
fluorímetro calibrado adecuado; o puede ser
determinado por retención de fitoplancton en un
filtro de fibra de vidrio, (GF/C con 0.7 μm tamaño
de poro nominal) en un volumen dado de agua
marina, extracción de clorofila y medida
espectrofotomérica de la concentración de Chl a
(Aminot, Rey 2000). El método de Aminot and
Rey (2000) implica medidas de absorbancia a
diferentes longitudes de onda, tanto del extracto
clorofílico como del extracto clorofílico
acidificado. El extracto es acidificado añadiendo
dos gotas de ClH 0.1 N en la cubeta del
espectrofotómetro. La medida de absorbancia
después de la acidificación de la muestra es un
paso necesario para corregir los desvíos
provocados por la presencia de feopigmentos a
(productos de degradación de la clorofila a).
Este método es el recomendado para aguas
costeras y de estuarios. Para información sobre
la medición de la concentración de clorofila a
véase ecuación 1 en el Anexo.
Pigmentos de diagnóstico (DP, ecuación 3 y
4 véase el Anexo). Filtrar el extracto pigmentario
a través de un filtro de Teflon de 0.2 μm. Para la
separación de los pigmentos fotosintéticos se
requieren técnicas de HPLC (High Pressure
Liquid Chromatography) (Foto 1). Llegados a
este punto, es necesaria la colaboración del
laboratorio de química marina, donde se realizan
PRACTICAL EXPERIMENTS GUIDE FOR ECOHYDROLOGY
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un análisis de pigmentos fotosintéticos, y donde
el personal está entrenado para las
realizaciones de HPLC. Mueller et al. (2003)
proporcionan una guía detallada del análisis de
pigmentos de fitoplancton por HPLC. El
resultado del análisis por HPLC es un
cromatograma donde una serie de picos
corresponden a diferentes pigmentos; las
concentraciones de pigmentos se estiman a
partir de la altura y amplitud de los picos (Figura
1 véase el Anexo).
Un índice de tamaño celular (SI) puede ser
obtenido para cada muestra utilizando la fórmula
de Bricaud et al. (2004) (ecuación 5, véase el
Anexo).
Foto 1. Equipamiento para análisis por HPLC de
la composición de los extractos pigmentarios
obtenidos a partir de las muestras de agua.
3. Materiales y equipamiento
a) Materiales y equipamiento para el
muestreo del agua y su análisis:
• vestuario: botas de agua, chaqueta
impermeable, guantes y gafas protectoras
apropiadas de laboratorio. Manipular los
reactivos con cautela;
• recipientes apropiados para el muestreo en
las estaciones;
• botellas oceanográficas de muestreo;
• frigorífico (-20ºC y/o -80ºC, utilizar guantes
cuando se manipule material congelado);
• bomba y equipamiento de vacio para filtrado
de agua de mar;
• filtros GF/C (0.7 μm);
• tubos de ensayo y tubos de centrifugación;
• el tipo de material necesario para analizar los
macronutrientes dependerá de la
disponibilidad del equipamiento y de la
metodología escogida (automática o manual);