guía práctica de experimentos para - Ecologia e Gestão Ambiental

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cantidad será expresada en la concentración de Clorofila a. La Clorofila a será medirá in vivo con un fluorímetro o será procesada para el análisis espectofotométrico (Holm-Hansen 1978, Madden, Day 1992). Los cambios en la concentración de oxígeno disuelto, pH y temperatura en el agua serán medidos con un conjunto de electrodos. Análisis complementarios de la cantidad total de bacterias en el agua podrán ser provistos con microscopios de fluorescencia en muestras teñidas con DAPI (Porter, Feig 1980). 2. Diseño experimental El diseño del experimento considera 3 variantes -3 de concentraciones diferentes de PO4 : agua natural de lago usada en la opción de control, ~20 μg dm -3 y ~200 μg dm -3 . Esto es para demostrar cómo el mecanismo enzimático de la liberación de P funciona en diferentes niveles de cantidad de ortofosfato. Cada opción se prepara por triplicado en un recipiente de vidrio de al menos 10 dm -3 (deberían prepararse 9 recipientes en total). El agua tomada del lago debería ser primero filtrada a través de una red de plancton de malla GUÍA PRÁCTICA DE EXPERIMENTOS PARA ECOHIDROLOGÍA de 50 µm para eliminar el zooplancton, que se alimenta de fitoplancton y podría ser una fuente de subestimación de la Clorofila a durante el experimento. A continuación, el agua debe ser filtrada otra vez a través de una red de plancton de maya de 20 µm para eliminar el fitoplancton. El fitoplancton debe cuidadosamente recogido en un recipiente mientras se prepara para la utilización de 3 variantes de los experimentos (Figura 1). Después de la filtración debe ser hecha una medición inicial de la concentración de ortofosfato en el agua. Una vez que se -3 conozca la concentración se prepara 30 dm de agua para cada variante por la dilución de agua del lago con agua destilada para obtener una -3 -3 concentración baja de PO4 (~20 μg dm ) y por adición de K2HPO4. para conseguir la más alta (~200 μg dm -3 ). Rellenar los recipientes con agua y añadir cuidadosamente el plankton recogido en cantidades idénticas para cada recipiente. En el punto de partida del experimento todos los parámetros deben ser analizados. Los recipientes deben ser dejados para su incubación, bien iluminados, durante 2 semanas. Las muestras para los análisis deben tomarse, al menos, cada dos días 34
VARIANT 1 (CONTROLL) Natural nutrition conditions (in triplicates) GUÍA PRÁCTICA DE EXPERIMENTOS PARA ECOHIDROLOGÍA Preparation of the experiment -3 1. Prepare 9 glass containers (volume at least 10 dm ) 2. Filter lake water thru the plankton net to remove phytoplankton, keep phytoplankton gently to be used later -3 3. Measure concentration of PO 4 in lake wter and prepare solutions: -3 of about 20 µ g dm (by dillution with distilled water) -3 and about 200 µ g . dm (by addition of K2HPO 4) 4. Fill glass containers with water (see behind) and add the same amount of phytoplankton to each container. 5. Perform incubation in light for about 2 weeks. 1a 1b 1c VARIANT 2 -3 PO 4 depleted conditions -3 final conc. ~20 µg dm (in triplicates) 2a 2b 2c VARIANT 3 -3 PO 4 enriched conditions -3 final conc. ~200 µg dm (in triplicates) 3a 3b 3c Measurments (at least every secound day) 1. chlorophyll-a concentration -3 2. PO 4 concentration 3. Alkaline Phosphatase Activity (APA) 4. total nuber of bacteria 5. pH, temperature, dissolved oxygen concentration (DO) Figura 1. El esquema del diseño del experimento para la demostración de cómo la APA mantiene las afloramientos de fitoplancton Antes de comenzar con los análisis de la APA, -3 P-PO4 , clorofila a, hay que asegurarse de preparar las curvas de calibración si fuese necesario. Adicionalmente, la composición de especies de fitoplancton con el método microscópico puede ser aplicado una vez por semana. 3. Materiales y equipo a) Experimentos de campo Se necesitarán materiales y equipo para recoger agua y para medir los parámetros físico- químicos básicos del agua: • barco y toma muestras de agua para recoger agua; • cestos y recipientes para el agua recogida y para transportarla al laboratorio; • red de plancton de malla de 50 μm para eliminar el zooplancton; • red de plancton de malla de 20 μm para eliminar el fitoplancton – importante: removed el fitoplancton eliminado debe ser recogido en un recipiente ya que va a ser usado en el experimento; • envase para guardar cuidadosamente el fitoplancton eliminado y para transportarlo al laboratorio; • sonda para medir la temperatura, pH y hacerlo en el agua; • ropa: botas resistentes al agua para caminar en los márgenes, chaleco a prueba de agua. b) Experimentos de laboratorio Necesitará usarse un laboratorio húmedo, preferentemente con sistemas de acuarios o contenedores de vidrio (Foto 1). 35
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