guía práctica de experimentos para - Ecologia e Gestão Ambiental

exposición solar. Además, todos los materiales
usados durante la recogida de la muestra, la
manipulación y el tratamiento debe ser no
reactiva, es decir, ni inhibidor ni estimulante para
el fitoplancton y el microzooplancton. Debido al
tiempo necesario para preparar las muestras de
agua libres de partículas, debería considerarse
la posibilidad de recoger la muestra de agua y
filtrarla en un día, y recoger agua otra vez y
empezar el experimento al día siguiente.
b) Preparación de tratamientos
experimentales (diluciones)
Preparar el volumen deseado de muestra de
agua libre de partículas (< 0.2 µm) que se usará
para diluir las muestras de agua no
manipuladas. Puede acelerarse este proceso
usando una filtración secuencial previa a través
de mallas de 100 µm y 10 µm por gravedad.
Entonces, usar una bomba de vacío y filtros de
policarbonato (0.2 µm de tamaño de poro) para
preparar muestras de agua libres de partículas.
En la práctica, pueden usarse filtros con un
tamaño mayor de poro (Ej., filtros de fibra de
vidrio Whatman GF/F o filtros de cápsula
Gelman). Idealmente, este proceso de filtración
debería producir agua libre de partículas sin
contaminantes bioactivos añadidos. Preparar
una serie de cinco diluciones de la muestra (Ej.,
0.125, 0.25, 0.5, 0.75, y 1.0). Considerar el
factor de dilución como la proporción de la
muestra natural. Una representación
esquemática de los tratamientos experimentales
aparece en la Figura 1.
Figura 1. Representación esquemática de
diferentes tratamientos experimentales o
diluciones de la muestra. Se debe tener en
cuenta que la muestra sin diluir sin adiciones de
nutrientes y el agua libre de partículas con
GUIA DE EXPERIMENTOS PRÁCTICOS PARA ECOHIDROLOGÍA 47
adiciones de nutrientes también debería ser
usada. (Nota. Muestra de agua (water sample)
Muestra de agua filtrada (filtered water sample)
Dilución (dilution))
El uso adecuado de probetas adecuadas para
ofrecer volúmenes exactos de muestras y
muestras libres de partículas. Añadir soluciones
de macronutrientes inorgánicos KNO3, KH2PO4,
y Na2SiF6 a todas las diluciones (Ej., diluciones
0.125+, 0.25+, 0.5+, 0.75+, y 1.0+). Para
detalles de soluciones de preparación véase
Domingues, Barbosa 2009 (Capítulo 4). Puesto
que la concentración de organismos
microzooplanctónicos, fuentes potenciales de
nutrientes inorgánicos, varía en las diluciones,
son añadidos nutrientes inorgánicos para
asegurar que la limitación del crecimiento de
fitoplancton sea similar en las diferentes
diluciones. Los nutrientes deberían ser añadidos
en exceso y por igual a todos los tratamientos
experimentales significando que las
concentraciones finales deberían ser similares a
las concentraciones máximas en las áreas de
muestreo. Además, preparar un tratamiento con
agua sin diluir sin nutrientes añadidos (muestra
de agua sin manipular, dilución 1.0). Preparar
cada tratamiento experimental (dilución de
0.125+, 0.25+, 0.5+, 0.75+, 1.0+, y 1.0) por
duplicado. Medir la concentración de clorofila a
(véase sección 4.d) en el agua libre de
partículas en cada tratamiento experimental e
incubar todos los tratamientos experimentales.
Además, incubar las botellas de réplica con
agua libre de partículas enriquecida con
nutrientes. Asegurarse que las 14 botellas
incubadas están completamente cerradas, sin
burbujas de aire, y herméticamente cerradas.
Envolver los cuellos de las botellas con cinta de
laboratorio si es necesario.
c) Incubación
Si es posible las botellas de experimentación
deberían ser incubadas in situ, usando una
superficie flotante conectada a una línea firme y
un ancla. Si la incubación in situ no es posible,
incubar todas las botellas de experimentación
dentro de un tanque al aire libre, expuesto a una
intensidad de luz luminosa equivalente a Im
y a
un fotoperíodo natural. El promedio de la
intensidad de la luz en el estrato de la mezcla
(Im) se calculará como un porcentaje de la
intensidad de las luz en el estrato superficial (Io),
usando valores de profundidad del estrato
mezclado (Zm) y el coeficiente de extinción de la
luz vertical (Ke) de acuerdo a la ecuación 1