guía práctica de experimentos para - Ecologia e Gestão Ambiental

) Experimentos de laboratorio
-acuario;
-bomba peristáltica;
-material de disección;
-pipetas;
-placa calentadora;
-microscopio con cámara incorporada;
-portaobjetos;
-recipientes de tinción
-reactivos: colchicina, citrato sódico, ácido
acético y alcohol absoluto y giemsa.
c) Análisis de datos
-ordenador;
-programa para tratamiento de imágenes.
3 – Descripción de la experiencia
Preparación de los cromosomas:
Todos los animales juveniles recogidos en los
locales A y B (con los diferentes modelos de
especies de bivalvos seleccionados) deben ser
incubados (durante la noche) durante 8-9h en
una solución de colchicina en agua de mar al
0.005% (Foto 1).
Foto 1- Incubación en colchicina durante la
noche.
A continuación, las branquias deben ser
retiradas y tratadas durante 30 min en citrato
sódico al 0.9 % en agua destilada. Después el
material debe ser fijado en una solución fresca
de alcohol absoluto y ácido acético (3:1) con tres
cambios cada 20 min. Las partes fijadas de las
branquias de cada individuo deben ser
separadas en ácido acético al 50% con agua
destilada. La preparación de las muestras deben
seguir la técnica de “air-drying” de Thiriot-
Quiévreux y Ayraud (1982) (Foto 2), en la cual la
solución obtenida por la disociación anterior es
PRACTICAL EXPERIMENTS GUIDE FOR ECOHYDROLOGY
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dejada caer a unos 50 cm de altura en una placa
calentadora a 44ºC.
Foto 2- Técnica de “Air drying” para preparación
de muestras de cromosomas en el portaobjeto
utilizando una placa calentadora.
El material (núcleos interfásicos y metafases) se
adherirá al vidrio del porta y el líquido sobrante
aspirado con suavidad.
Microscopía y procesamiento de las imágenes
Las preparaciones de microscopía realizadas en
el apartado anterior deben ser teñidas con
Giemsa al 4%, pH 6.9 durante 10 a 15 minutos.
Ya en el microscopio, seremos capaces de
observar tanto núcleos interfásicos como
metafases. Imágenes de las metafases de las
especies seleccionadas en los locales A y B
deben ser tomadas con una cámara incorporada
al microscopio (Foto 3).
Foto 3- Observación de las muestras con
microscopio y cámara acoplada.