guía práctica de experimentos para - Ecologia e Gestão Ambiental

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Colección de animales y agua: manipulación Todos los individuos serán depurados durante la noche en agua dulce artificial. Se proponen dos experimentos manipulados para animales: Figura 1. Diseño experimental GUÍA DE EXPERIMENTOS PRÁCTICOS PARA ECOHIDROLOGÍA A. Llimnoperna fortunei será recogida desde el entorno fijo a su sustrato y transportada al laboratorio. 58
B. Llimnoperna fortunei será recogida del entorno cortando el viso y después de su traslado al laboratorio, serán eliminadas en un vaso con una superficie irregular para permitir que su viso se resintetice. Todos los animales correctamente unidos y que muestren una actividad de filtración se considerarán adecuados para el experimento, de lo contrario serán eliminados. Se recogerán y transportarán muestras de agua hasta el laboratorio en envases a 4 °C y colocados en decantadores para poder obtener SPM, para ser física y químicamente caracterizadas y para preparar el trabajo de suspensión, a partir de agua dulce semidura (EPA,…….). Total de agua, SPM y análisis de heces Una taza de filtros pesada con anterioridad (GF 0,7 mm, 13 mm de diámetro) se usará para determinar SPM por gravimetría (100°C 24 hs), Una determinación en bruto de materia orgánica será estimada por muestras reducidas a cenizas (600°C, x hs MÉTODOS ESTÁNDAR). El contenido total de hidrocarbono será cuantificado por IR. La composición de la mezcla se determinará por extracción con disolventes, purificación e identificación y cuantificación por el GC-MS. Por ultimo, la relación C:N se determinará a través de un analizador elemental. Experimentos de laboratorio Se necesitará un laboratorio húmedo preferiblemente con controles de fotoperíodos y temperatura. • 20 envases de vidrio para los controles y grupos tratados; • Dispositivos de decantación para la separación de SPM; • Envases con agitación para la preparación en suspensión de SPM; • turbidímetro, jeringas, soportes de filtro, filtros y tazas pesados con anterioridad, para seguir la evolución de la deposición; • Balanza para determinar el tamaño de los animales; • Horno de mufla para determinar el SPM y también el peso del tejido seco y el peso del tejido seco libre de cenizas; • Analizador elemental; • IR; • GC-MS; GUÍA DE EXPERIMENTOS PRÁCTICOS PARA ECOHIDROLOGÍA • Baño ultrasónico para la extracción; • balanza; • agitador magnético para mezclar hidrocarburos preparados. Análisis de datos • ordenadores; • hoja organizadora de datos; • software de gráficos básicos y estadística. 4. Descripción del experimento ETAPA 1. Tras la depuración de los animales, éstos serán agrupados de manera aleatoria y expuestos al aire durante una hora. Todos los acuarios experimentales serán rellenados con 2l. de SPM en suspensión y agitación; una muestra de agua será recogida antes de añadir los animales (cinco de tamaño estándar) y el momento cero será registrado para cada envase cuando los animales comiencen a mostrar la actividad de filtro (esta vez deberá grabarse). Estas muestras de agua se usarán para análisis químicos. Las muestras de agua deberán ser tomadas a las 0, 0.5, 1, 3, 6, 12 y a las 24 horas, y se realizará la determinación de la tasa de deposición por las lecturas de filtración y turbidez. El experimento continuará hasta que los valores de turbidez en el control se hagan constantes. Al final de los experimentos, los animales serán eliminados y medidos, después abiertos a través de un corte en los músculos abductores y luego pesados. Se eliminarán y pesarán las partes blandas para determinar la biomasa fresca, luego se determinará el peso muerto y el peso libre de ceniza para estimar la tasa de deposición relacionada con la biomasa del animal. Se realizará una comparación de la eficacia de la biodeposición en diferentes concentraciones de SPM. Los Pellets y el SPM que permanezcan en el acuario serán usados para determinar las relaciones C:N. ETAPA 2. Un preparado de SPM enriquecido con hidrocarbonos en una concentración similar a la que ocurre durante un derrame de petróleo, estará en suspensión en agua artificial por agitación. La concentración que vaya a ser usada se estimará mediante un ensayo NOEC o LD10 96 59
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