Quantitative Analyse von Arzneistoff-Membran-Wechselwirkungen ...

Chromatografische Bestimmung des Verteilungsverhaltens
4 Chromatografische Bestimmung des Verteilungsverhaltens
4.1 Charakterisierung von chromatografischen Säulen als künstliche
immobilisierte Membran
Eine andere Methode zur Analyse des Einflusses von Ladungen und von intermolekularen van-der-
Waals-Wechselwirkungen auf das Verteilungsverhalten von Arzneistoffen sowie zur Bestimmung von
Lipophiliekonstanten stellen hochdruck-flüssigchromatografische Untersuchungen dar, die mit
n-Octanol beschichteten RP18-HPLC-Säulen und mit n-Octanol gesättigtem Puffer durchgeführt
werden (Miyake und Terada 1978). Seit ca. 10 Jahren werden auch mit Phosphatidylcholin bedeckte
Oberflächen als stationäre Phasen verwendet (Ong et al. 1995). Die an die Säulenoberfläche kovalent
über eine &-Carboxylgruppe gebundenen Phospholipidbausteine werden als immobilisierte künstliche
Membran (immobilized artificial membrane = IAM) bezeichnet, da deren Aufbau einer Zellmembran
sehr ähnlich ist. Direkt auf der Silica-Oberfläche befindet sich eine ca. 15 ' starke lipophile Schicht
von parallel angeordneten Kohlenwasserstoffketten der Fettsäuren (Abb. 22). Auf dem Rückgrat
eines Glycerolmoleküls bilden die Cholinkopfgruppen eine polare Oberfläche mit einer Tiefe von 7 '.
Die Ladungszentren jedes elektrisch neutralen Phosphatidylcholin-Moleküls haben eine Abstand von
ca. 4.5 '.
15A
7A
NH2
CH2
CH2
CH2
CH3
CH3 N
CH3
CH2
O
O C
NH2
CH2
CH2
CH2
CH2
C O
CH2
O
O P O
O
CH2
O
CH2
C O
NH
CH2
CH2
CH2
NH2
CH2
CH2
CH2
CH3
CH3 N
CH3
NH2 NH2
CH2 CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
CH2
O
O C
CH2
C O
CH2
O
O P O
CH2
O
O
CH2
C O
NH NH2
CH2 CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
NH2
CH2
CH2
CH2
CH3
CH3 N
CH3
CH2 CH2
O
O P O
O
CH2 CH2 CH2
O O
O C C O
Abbildung 22: Struktureller Aufbau einer immobilisierten künstlichen Membran
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P-NMR-Messungen zeigten, dass die IAM-Oberfläche ähnliche Bewegungseigenschaften wie die
Oberfläche fluider Liposomen besitzt (Markovich et al. 1989; Stevens et al. 1989; Qiu und Pidgeon
1993). Unerwünschte Wechselwirkungen freier Endgruppen des Amino-RP-Materials mit zu
eluierenden Molekülen können durch endcapping verhindert werden, indem sie mit Methylglycolat in
NH2 NH2
CH2 CH2
CH2 CH2
CH2 CH2
C O
NH
CH2
CH2
CH2
NH2
CH2
CH2
CH2
50