Quantitative Analyse von Arzneistoff-Membran-Wechselwirkungen ...

Chromatografische Bestimmung des Verteilungsverhaltens
30 Vol.-%. Die Messungen erfolgten bei Umgebungstemperatur mit jeweils 2 bis 10 µl Probenlösung
mit einer Flussrate von 1 ml/min und bei einer Detektionswellenlänge von 260 nm für alle Verbindungen.
Die Messungen der Retentionszeit wurden mindestens viermal wiederholt; die Mittelwerte
dienten der Berechnung der Kapazitätsfaktoren (Abschnitt 9.4, Tab. A5).
4.3 Ergebnisse und Diskussion
4.3.1 Die Kapazitätsfaktoren der Arzneistoffe
In Vorversuchen bei pH-Werten des Laufmittels zwischen 6 und 7 zeigte sich (Elnaw 1997; Cloos
1998), dass die Verbindungen unter starkem Tailing eluieren. Freie OH-Gruppen der Silica-Schicht
können dafür verantwortlich sein. Eine gute Reproduzierbarkeit der Messungen am IAM-Säulen ist
bei pH-Werten < 6 gegeben. Bei einem schwach sauren pH von 5.4 bestand eine akzeptable Signalsymmetrie
und die basischen Verbindungen lagen einheitlich protoniert vor. Eine Vergleichbarkeit der
Verteilungskonstanten mit den potentiometrisch zugänglichen logD-Werten ist somit möglich. Die
Ergebnisse mit den zur Verfügung stehenden Arzneistoffen als auch mit drei Referenzsubstanzen sind
in der Tab. 10 dargestellt.
In die multiple lineare Regression wurden jeweils nur die logk´ XY-Werte einbezogen, die sich
entweder in der Phosphationen- oder der Acetonitrilkonzentration oder in beidem unterschieden, um
eine Übergewichtung einzelner Retentionszeiten zu vermeiden. Einzelne Messwerte (Retentionszeiten)
wurden ausgeschlossen, wenn sie sich mehr als zwei Standardabweichungen vom berechneten
logk´ XY-Wert unterschieden. Das Auslassen einzelner Punkte war die Folge von Misch- und
Volumenfehlern, die bei der Herstellung des Puffers und des Laufmittels entstanden. Die Zahl der
einzelnen Retentionszeiten, die in die Regression eingegangen sind (Tab. 10), wurden in Diplomarbeiten
(Elnaw 1997; Cloos 1998) dokumentiert oder durch eigene Messungen vervollständig.
Alle Varianzwerte liegen bei den untersuchten Verbindungen oberhalb von 0.95. Die größeren
Standardabweichungen, relativ zu den übrigen Regressionen, fallen bei den logk´-Werten der Arzneistoffe
auf, die aus vier bis sieben Einzelwerten (n) extrapoliert wurden. Da die Messbedingungen
bekannt waren, wählte ich einen wesentlich breiteren Bereich im Acetronitrilgehalt der Laufmittel.
Dadurch wirkten sich Schwankungen von ± ½ Vol.-% AcCN durch den linearen Einfluss (Gl. 10)
stärker auf die statistische Qualität der logk´-Extrapolation aus.
Die negativen Koeffizienten A und B belegen (Tab. 10), dass mit zunehmender Acetonitril- und
Phosphationenkonzentration des Laufmittels die Retentionszeiten abnehmen. Erstens besitzt
Acetonitril eine höhere Elutionskraft als Wasser für lipophile Moleküle; zweitens steigt die
Ladungsdichte im Laufmittel bei einer höheren Ionenkonzentration, die zu zunehmender Besetzung
von elektrostatischen Wechselwirkungsstellen an der IAM-Oberfläche durch Phosphationen führt. Mit
zunehmender Ionenstärke des Laufmittels müsste es auch zu einem „Aussalzeffekt“ an den gelösten
Arzneistoffmolekülen an der Säule kommen. Dieser polare Effekt konnte nicht beobachtet werden.
Bei den neutralen Molekülen stellte sich der Phosphatkoeffizient B als nicht signifikant heraus.
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