Dissertationsschrift - Ralf Liedke 1999

7 Arbeitsvorschriften 147
Durch geeignetes Schrägstellen wird die Kapillare auf eine Höhe von genau 40 mm gefüllt.
Die Kapillare enthält somit genau 28 µl der Lösung. Die Flüssigkeitssäule reicht aus, um die
gesamte Höhe der Meßzelle (Cavity) auszufüllen. Die Kapillare wird mit kleinen zugeschweißten
Schlauchstücken aus Polypropylen an beiden Seiten verschlossen und in das
eigentliche Meßgefäß gegeben. Das Meßgefäß, das die Kapillare enthält, wird nun in die
Meßzelle des ESR-Spektrometers gesetzt und das Spektrum der Probe wird registriert.
Zur Erzeugung von Radikalen in einer einmolaren Fructose-Alanin-Lösung (s. o.), wird die
Lösung mit der Röntgenquelle eines Sequenz Röntgenspektrometer bestrahlt. Die Lösung
wird ebenfalls in eine Kapillare gefüllt und ESR-spektroskopisch vermessen.
Zur Aufnahme des DMPO-OH Vergleichsspektrum wird eine Lösung aus 100 µl Wasser und
10 µl DMPO parallel dazu bestrahlt und das ESR-Spektrum aufgenommen.
7.6.1.2 Photometrische Bestimmung von Radikalen mit der DPPH-Methode
Geräte
• UV/VIS Spektrometer Lambda 40 (Perkin Elmer, Überlingen)
• Quarzküvetten, 1,000 cm (Carl Zeiss, Jena)
• Schüttelmaschine 3005 (GFL, Burgwedel)
DPPH-Reagenz
• 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (Fluka, Buchs CH)
• Chloroform, z. A. (Merck, Darmstadt)
10 mg DPPH werden in 100 ml Chloroform gelöst und bis zur Analyse dunkel im Kühlschrank
gelagert.
Durch geeignete Verdünnung dieser Reagenzlösung mit Chloroform stellt man sich eine
Kalibrationsreihe her, die ebenfalls photometrisch vermessen wird. Die Auswertung der
Proben erfolgt über die hieraus resultierende Kalibrationsgerade unter Berücksichtigung der
Einwaage und der Verdünnungsschritte.
Zur Herstellung einer reinen 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazin-Lösung, die keine Radikale mehr
enthält, versetzt man einen Teil des DPPH-Reagenz mit einer wäßrigen Lösung, die einen
Überschuß an Ascorbinsäure enthält und schüttelt diese einige Zeit kräftig. Die Abwesenheit
von DPPH-Radikalen erkennt man an der vollständigen Entfärbung der organischen Phase.
Durchführung
Jeweils 2,0 ml eines Fructose-Alanin-Modells (angesetzt gemäß 7.2.1), das jedoch kein
o-Phenylendiamin enthält, werden in einem Sovirelglas für zwei Stunden im Trockenschrank
auf 80 °C erhitzt. Danach kühlt man die Probe schnell ab und entnimmt ein 1,0 ml Aliquot.
Dieses Aliquot wird in einem Sovirelglas mit 3,0 ml DPPH-Reagenz versetzt und auf der