Dissertationsschrift - Ralf Liedke 1999

2 Analytische und präparative Arbeitsweisen 24
Der Nachweis der α-Dicarbonylverbindungen in Form ihrer stabilen Chinoxalinderivate ist
demgegenüber unproblematischer. Auch hier gibt es die Möglichkeit, die Chinoxaline mittels
HPLC an Umkehrphasen zu bestimmen [51][52].
Ledl [53] und Kawakishi [21] wenden allerdings auch gaschromatographische Methoden an,
um die Chinoxaline in Form ihrer Trimethylsilyletherderivate oder nach Acetylierung zu
bestimmen. Ausgehend von diesen Trennungsverfahren wurde für die eigenen Untersuchungen
eine gaschromatographische Methode entwickelt, mit der die einfache Möglichkeit
besteht, sowohl Zucker und Amadori-Verbindungen als auch Chinoxalinderivate parallel
in einem analytischen Lauf nachzuweisen und zu quantifizieren.
H
H C NH R
C O
HO C H
H C OH
H C OH
CH OH 2
HO NH 2
H
H
C NH R
C N OH
HO C H
H C OH
H C OH
CH OH 2
TMCS
BSA
H
H
C NH R
C N OTMS
TMSO C H
H C OTMS
H C OTMS
CH OTMS 2
TMS =
Abbildung 19: Oximierung und Silylierung von reduzierenden Zuckern und Amadori-Verbindungen am
Beispiel einer Amadori-Verbindung (R = Aminosäure-Rest)
Die Methode basiert auf dem gaschromatographischen Nachweis von Amadori-Verbindungen
nach Wittmann. Die zu analysierende Lösung wird gefriergetrocknet und der wasserfreie
Rückstand in Pyridin gelöst, das Hydroxylammoniumchlorid enthält. In einem ersten
Schritt werden nun alle Substanzen mit einer freien Carbonylgruppe in die Oxime überführt
(Abbildung 19). Bei den untersuchten Modellen und Lebensmitteln sind das die reduzierenden
Mono- und Disaccharide sowie die Amadori-Verbindungen. Die Überführung dieser Carbonylverbindungen
in die Oxime hat den Vorteil, daß sich bei der anschließenden gaschromatographischen
Trennung je Substanz nur zwei Peaks ergeben, die von der syn- und anti-
Form des Oxims herrühren. Dabei stellt der erste Peak im Chromatogramm die syn-Form
und der zweite die anti-Form des Oxims dar. Aldosen bilden aus sterischen Gründen bevorzugt
die syn-Form des Oxims, während Ketosen beide Formen in der gleichen Größenordnung
ausbilden [54][55]. Ohne die Oximierung wären je nach vorliegendem Kohlenhydrat
bis zu fünf Peaks denkbar (offene Form, Pyranose und Furanose in der α- oder β-Form). Die
Chinoxalinderivate und die nichtreduzierenden Zucker werden in diesem Schritt natürlich
nicht oximiert.
In einem zweiten Schritt werden die Oxime (Abbildung 19) und die übrigen Verbindungen wie
die Chinoxaline (Abbildung 20) in die Trimethylsilyletherderivate überführt. Hierfür stehen
eine Vielzahl von unterschiedlichen Silylierungsreagenzien zur Verfügung [56]. Bewährt hat
sich bei den eigenen Untersuchungen eine Mischung aus N,O-Bis(trimethylsilyl)-acetamid
H 3C
CH 3
Si
CH 3