Dissertationsschrift - Ralf Liedke 1999

7 Arbeitsvorschriften 151
Silylierungsreagenz
2,5 ml BSA und 0,8 ml TMCS werden kurz vor der Silylierung gemischt. Da das Silylierungsreagenz
sehr anfällig gegen Wasser und selbst Luftfeuchtigkeit ist, sollte immer nur die für
die anstehende Serie benötigte Menge Reagenz angesetzt werden.
7.6.3.2 Aufarbeitung der Probe
Die zu analysierende Lösung wird am Rotationsverdampfer zur Trockne eingeengt oder -
noch schonender - über Nacht gefriergetrocknet.
Der Rückstand wird in 0,5 ml Oximierungsreagenz aufgenommen und im Ultraschallbad gelöst.
Die Lösung wird zur Oximierung für eine halbe Stunde im Trockenschrank auf 70 °C
erhitzt.
Zur Silylierung gibt man anschließend in die abgekühlte Lösung 0,33 ml Silylierungsreagenz
(entspricht: 0,25 ml BSA + 0,08 ml TMCS) und erwärmt wieder für eine halbe Stunde im
Trockenschrank auf 70 °C.
Nach dem Abkühlen gibt man noch 0,25 ml TCTFE hinzu. Die erhaltene Lösung kann direkt
für die Gaschromatographie eingesetzt werden. Ein bei realen Proben eventuell auftretender
weißer Niederschlag wird abzentrifugiert und die überstehende Lösung zur Analyse verwendet.
7.6.3.3 Auswertung
Standardchemikalien
• D(+)-Glucose, wasserfrei (Merck, Darmstadt)
• D(-)-Fructose (Merck, Darmstadt)
• Saccharose (Serva, Heidelberg)
• Maltose (Merck, Darmstadt)
• meso-Inosit (Merck, Darmstadt)
• Amadori-Verbindungen aus 7.1.1
• Präparate aus 7.1.2, 7.1.3 und 7.1.4
Durchführung
Die Auswertung der Proben erfolgt über die zwei inneren Standards Xylit und Trehalose, die
bereits im Oximierungsreagenz enthalten sind. In einem Kalibrationslauf mit bekannten Konzentrationen
werden die Response-Faktoren für die einzelnen Substanzen ermittelt
(Gleichung 6). Dabei werden für die reduzierenden Zucker die Peakflächen der beiden
Peaks (syn- und anti-Form des Oxims) addiert. Während die Monosaccharide über den
inneren Standard Xylit quantifiziert werden, berechnet man die Disaccharide, sowie die
Amadori-Verbindungen und die Chinoxaline über den inneren Standard Trehalose.