Page de garde - Université de Tlemcen

- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE -
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XIII.1.1. Préparation des inoculums :
La méthode de préparation des inoculums est celle préconisée par la SFM
(communiqué de 2005) qui consiste à préparer, à partir d’une culture de 18-24h de la bactérie
étudiée sur le milieu gélosé, une suspension en solution saline (0.9% NaCl) équivalente au
standard McFARLAND 0.5 (~ 10 8 UFC/ml). Cette suspension peut être obtenue par la mesure
de la densité optique (D.O) allant de 0.08 à 0.1 lue à 625nm (standardisation de
l’antibiogramme selon l’OMS, 1999).
Par la suite, on prend 1ml de la suspension de l’inoculum, on l’étale par inondation à
la surface d’une boite de Pétri contenant de la gélose de MUELLER-HINTON, on déverse
l’excès, ce qui correspond à une densité de 10 6 à 10 8 UFC/ml et on laisse sécher la boite de
Pétri dans la zone septique du bec Bunsen.
XIII.1.2. Distribution des disques :
A l’aide d’un distributeur de disques, les différents disques des antibiotiques sont
placés sur la gélose séchée dans des boites Pétri, puis les boites sont laissées durant 20
minutes à la température ambiante pour permettre la diffusion de l’échantillon. Elles sont
ensuite mises à l’étuve à 37°C pendant 18 à 25h.
La lecture se fait par la mesure du diamètre de la zone d’inhibition, puis comparée aux
tableaux de lecture de la SFM (2005).
Les tableaux de lecture de la SFM permettent de définir si la souche étudiée est
résistante ou sensible aux antibiotiques.
XIII.2. Souches de référence :
Durant notre étude, plusieurs souches bactériennes seront étudiées, pour la plus part
sont des souches de référence c-à-d, des souches préalablement déterminées, ainsi, pour leurs
culture on ne réalise que la coloration de gram pour voir si ces des gram (+) ou (-).
D’autre culture par contre, sont issue de souche sauvage d’origine environnementale
(du CHU de Tlemcen). Pour ces cultures, une identification de la souche est obligatoire, ainsi
les différents tests d’identification sont réalisés : plaque Api 20E, ODC, Mannitol mobilité,
Oxydase, Catalase (H2O2), Indol, LDC, ADH, TSI, Coagulase etc., et enfin la coloration de
gram.
XIII.3. Résultats :
Remarque : pour toutes les cultures, on utilise le milieu de MUELLER-HINTON (Gélose),
sauf dans le cas des Pseudomonas, ou on utilise le milieu de CHAPMAN.
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