Page de garde - Université de Tlemcen

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- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE - …………………………………………………………………………………………………... XIII.1.1. Préparation des inoculums : La méthode de préparation des inoculums est celle préconisée par la SFM (communiqué de 2005) qui consiste à préparer, à partir d’une culture de 18-24h de la bactérie étudiée sur le milieu gélosé, une suspension en solution saline (0.9% NaCl) équivalente au standard McFARLAND 0.5 (~ 10 8 UFC/ml). Cette suspension peut être obtenue par la mesure de la densité optique (D.O) allant de 0.08 à 0.1 lue à 625nm (standardisation de l’antibiogramme selon l’OMS, 1999). Par la suite, on prend 1ml de la suspension de l’inoculum, on l’étale par inondation à la surface d’une boite de Pétri contenant de la gélose de MUELLER-HINTON, on déverse l’excès, ce qui correspond à une densité de 10 6 à 10 8 UFC/ml et on laisse sécher la boite de Pétri dans la zone septique du bec Bunsen. XIII.1.2. Distribution des disques : A l’aide d’un distributeur de disques, les différents disques des antibiotiques sont placés sur la gélose séchée dans des boites Pétri, puis les boites sont laissées durant 20 minutes à la température ambiante pour permettre la diffusion de l’échantillon. Elles sont ensuite mises à l’étuve à 37°C pendant 18 à 25h. La lecture se fait par la mesure du diamètre de la zone d’inhibition, puis comparée aux tableaux de lecture de la SFM (2005). Les tableaux de lecture de la SFM permettent de définir si la souche étudiée est résistante ou sensible aux antibiotiques. XIII.2. Souches de référence : Durant notre étude, plusieurs souches bactériennes seront étudiées, pour la plus part sont des souches de référence c-à-d, des souches préalablement déterminées, ainsi, pour leurs culture on ne réalise que la coloration de gram pour voir si ces des gram (+) ou (-). D’autre culture par contre, sont issue de souche sauvage d’origine environnementale (du CHU de Tlemcen). Pour ces cultures, une identification de la souche est obligatoire, ainsi les différents tests d’identification sont réalisés : plaque Api 20E, ODC, Mannitol mobilité, Oxydase, Catalase (H2O2), Indol, LDC, ADH, TSI, Coagulase etc., et enfin la coloration de gram. XIII.3. Résultats : Remarque : pour toutes les cultures, on utilise le milieu de MUELLER-HINTON (Gélose), sauf dans le cas des Pseudomonas, ou on utilise le milieu de CHAPMAN. 111
- CHAPITRE VI : ACTIVITE ANTIBACTERIENNE - …………………………………………………………………………………………………... - Milieu de MUELLER-HINTON : (g/l) pH = 7.4 Macération de viande de bœuf 300ml Hydrolysat 17.5g Amidon 1.5g Agar 10g - Milieu de CHAPMAN : (g/l) pH = 7.6 – 7.8 Peptone 11g Extrait de viande 1g NaCl 75g Mannitol 10g Agar 15g Rouge de phénol 0.025g XIII.3.1. Coloration de gram : étudiées. Durant notre travail et suite à leurs identifications, 14 souches bactériennes seront Tableau 22 : Identification des bactéries Référence Bactéries Coloration de Gram Type de Gram Souches de référence 25923 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) 27853 Pseudomonas aeruginosa Rose Bacille Gram (-) 25922 Escherichia coli Rose Bacille Gram (-) 29213 29619 Streptococus pneumoniae Violette Cocci Gram (+) 43300 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) 25913 43866 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) Souches sauvages (Prélèvement) Sal* Salmonela typhi Rose Bacille Gram (-) P1 Pseudomonas aeruginosa Rose Bacille Gram (-) S2 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) S3 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) S4 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) S5 Staphylococus aureus Violette Cocci Gram (+) 112
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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE
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- REMERCIEMENTS - ……………
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- AVANT-PROPOS - ………………
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- INTRODUCTION GENERALE - ………
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- INTRODUCTION GENERALE - ………
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- CHAPITRE I : HISTOIRE DES PLANTES
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