universita' degli studi della tuscia facolta' di agraria ... - Unitus DSpace

V. Analisi di materiale Risanato da virus verso Non risanato
1. INTRODUZIONE
la tecnica di propagazione in vitro, basata sulla proliferazione di gemme da meristemi apicali,
oltre a favorire il miglioramento genetico, la rapida moltiplicazione, il facile mantenimento
del germoplasma e la disponibilità di carciofaie uniformi, è utilizzata nel risanamento da
virus. I virus si manifestano come ingiallimenti fogliari, ma possono rimanere anche latenti
riducendo però la crescita della pianta.
Sono state analizzati con marcatori molecolari alcuni genotipi di carciofo Romanesco (virosati
e risanati da virus), presenti nei campi sperimentali del Arsial di Tarquinia, appartenenti a una
prova di risanamento da virus attraverso la moltiplicazione in vitro.
2. MATERIALI E METODI
2.1 Collezione e caratterizzazione del materiale
Ai fini della caratterizzazione molecolare sono state collezionate 10 piante, appartenenti al
clone Grato I, 5 virosate e 5 risanate da virus, prelevando porzioni delle foglie più giovani (10
g) e conservandole in azoto liquido. Le piante campionate sono state identificate con una sigla
progressiva da 1 a 10.
2.2 Estrazione del RNA
L’estrazione del RNA per ciascun genotipo, è stata effettuata con l’RNeasy Plant Mini Kit
della QIAGEN.
2.3 Retrotrascriptasi per la sintesi del cDNA
L’RNA ottenuto nella estrazione è stato sintetizzato con il kit per la retrotrascriptasi del
cDNA, il cDNA ottenuto è stato quantificato su gel d’agarosio e con spetrofotometro, a
partire dal cDNA ottenuto da ciascuna delle 10 piante è stata effettuata una caratterizzazione
molecolare mediante l’applicazione di marcatori AFLP e ISSR.
105