universita' degli studi della tuscia facolta' di agraria ... - Unitus DSpace

trovare coltivatori che coltivano i loro ecotipi. Inoltre, recentemente, alcuni coltivatori hanno
compreso che il clone è suscettibile al freddo e alle malattie. La coltivazione del carciofo
Romanesco soprattutto in ambiente laziale ha visto negli ultimi anni una grande diffusione del
clone commerciale “C3”, caratterizzato da elevata precocità di produzione. La diffusione di
un singolo clone come detto, rende più vulnerabile la cinaricoltura regionale e nazionale che,
oltre a non poter competere per precocità con le produzioni del Sud d’Italia. Questa situazione
nel Lazio ha portato a una notevole riduzione dei campi coltivati con le altre varietà
commerciali ed ecotipi locali (quali. Castellamare, Grato, Campagnano), con conseguente
erosione genetica. Durante il presente lavoro è stato molto difficile reperire le aziende che
coltivassero ancora ecotipi di carciofo Romanesco.
Obiettivo del presente lavoro è stato quello di caratterizzare alcuni ecotipi di carciofo
Romanesco reperiti in aziende laziali, per una futura salvaguardia della biodiversità esistente.
2. MATERIALI E METODI
2.1 Collezione e caratterizzazione del materiale
Trenta genotipi di carciofo “Romanesco” di tre aziende della provincia di Latina, sono state
collezionate, prelevando porzioni delle foglie più giovani (10 g) e conservandole in azoto
liquido. Le piante campionate sono state identificate con una sigla progressiva da L1 a L90.
2.2 Estrazione del DNA
L’estrazione del DNA per ciascun genotipo, è stata effettuata secondo il protocollo riportato
da Doyle e Doyle (1990) apportando alcune modifiche.
- direttamente in un tubo eppendorf da 1,5 ml. è stata frantumata in azoto liquido una quantità
di tessuto fresco variabile da 0,1 a 0,2 g;
- sono stati aggiunti 800µl di tampone di lisi CTAB (2% CTAB; 0,1 M Tris HCl 1M pH 8,0;
20mM EDTA 0,5 M pH 8,0; 1,4 M NaCl; 0,2% ß-mercaptoetanolo);
- i campioni sono stati incubati per 120 min. a 60°C;
- successivamente sono stati centrifugati a 12000 rpm per 5 min, il surpernatante è stato
trasferito in un nuovo tubo eppendorf da 1,5 ml, sono stati aggiunti 800µl di cloroformio:alcol
isoamilico (24:1 v:v) e centrifugati a 12000rpm per 15 min;
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